改进的徒手切割水牛囊胚的方法及切割液

摘要

本发明公开了一种改进的徒手切割水牛囊胚的方法，并将切割液和培养滴合二为一，即将添加一定量牛磺酸的含有颗粒细胞的成熟培养液做成切割滴，命名为切割单层。该法主要包括制备切割单层、固定胚胎、切割胚胎、剥离切割胚，其中切割单层时直接采用添加牛磺酸的成熟培养液作为切割滴以取代传统切割液和培养滴；同时，该法对切割手法和切割载体进行了规范和简化，方法操作简便、无需处理透明带、切割后无需转移，可提高半胚的复原率(二分胚复原率达90％以上)，防止污染，保证切割效率，为此项技术能够真正进入实用和普及阶段，更好地为畜牧业服务奠定了基础。

主权项

一种改进的徒手切割水牛囊胚的方法，其特征在于包括以下步骤：<1>制备切割单层<2>固定胚胎在体式显微镜下，将胚胎放入单层中，将切割刀的刀尖固定在胚胎的9点钟、12点钟、15点或18点方向，距离胚胎2‑3倍胚胎直径的距离，以此为支点，然后在胚胎的左右两边将切割刀压下做两根射线切痕，分别与胚胎左右两边相切；<3>切割胚胎将胚胎固定在所画射线内，以原支点作为切割射线的原点，沿着胚胎的1/2处压下切割线进行切割，然后以原点为受力点，将切割刀缓慢立起，保持与刚放入单层滴时一样的状态，如果不需要再进行切割操作，将切割刀从切割单层中缓慢抽离；<4>剥离切割胚。