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一种土壤中残留Bt蛋白的原位酶联免疫定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1）去除待测土样中的动植物残体，充分研磨，通过50‑60目筛子使得土壤粒径在0.2mm以下；2）将研磨后的土样在高压湿热条件下灭菌15‑20分钟；3）称取灭菌后的土样1‑2g，放入10ml离心管中进行清洗去除土壤杂质；4）对去除过杂质的土壤土样表面进行封闭；5）对封闭后的土壤土样进行抗体结合检测：5.1）向封闭后的土样中加入3ml反应液Ⅰ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，50rpm/min，孵育2h，期间每隔20min颠倒离心管数次，之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.2）加入洗涤液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，震荡5min；之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.3）重复步骤5.2）三到五次；5.4）加入3ml反应液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，50rpm/min，孵育1h，期间每隔20min颠倒离心管数次，之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.5）加入洗涤液Ⅱ，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，震荡5min；之后10000rpm/min离心5min，弃上清液；5.6）重复步骤5.5三到五次；5.7）加入新鲜配置的3ml TMB显色液，充分摇匀后，水平置于摇床，室温，100rpm/min，孵育30min，期间每隔10min颠倒离心管数次，孵育结束后加入2M硫酸1ml终止反应，之后10000rpm/min离心5min，取上清液于酶标仪450nm进行检测。 |
