发明名称 |
一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法 |
摘要 |
本发明提供一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法,用于非疾病诊断目的。通过分别设计针对于CYP2A6基因和ALB基因的高特异性引物,利用荧光定量PCR技术来快速准确检测CYP2A6全基因缺失的方法。其中,针对CYP2A6的引物探针组合为:Fp:5’-TCCCACCCTACTCCCTCTCTC-3’;Rp:5’-GGAGGTGAACGCGGGA-3’;Probe:5’-FAM-TGGAGACAGGCCAGGGGGCG-BHQ2-3’。 |
申请公布号 |
CN104004852A |
申请公布日期 |
2014.08.27 |
申请号 |
CN201410270207.0 |
申请日期 |
2014.06.17 |
申请人 |
陕西佰美基因股份有限公司 |
发明人 |
戴鹏高;寻晓洁;陈超;邹晖 |
分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12Q1/68(2006.01)I |
代理机构 |
西安智邦专利商标代理有限公司 61211 |
代理人 |
胡乐 |
主权项 |
一种基于荧光定量PCR检测CYP2A6全基因缺失的方法,用于非疾病诊断目的,包括以下环节:(1)基因特异性引物的设计:针对CYP2A6基因设计的序列特异性引物探针组合,序列如下:上游引物:5’‑TCCCACCCTACTCCCTCTCTC‑3’下游引物:5’‑GGAGGTGAACGCGGGA‑3’探针:5’‑FAM‑TGGAGACAGGCCAGGGGGCG‑BHQ2‑3’针对ALB基因设计的序列特异性引物探针组合,序列如下:上游引物:5’‑TGTTGCATGAGAAAACGCCA‑3’下游引物:5’‑GTCGCCTGTTCACCAAGGAT‑3’探针:5’‑HEX‑AGTGACAGAGTCACCAAATGCTGCACA‑BHQ2‑3’其中,FAM为6‑carboxyfluorescein;HEX为6‑carboxy‑hexachlorofluorescein;BHQ2为Black Hole Quencher‑2;(2)模板的制备:提取待测样本的基因组DNA;(3)实时定量PCR:以反应体系总量20μL计,在同一个反应体系中,加入CYP2A6基因特异性上游引物250nM‑500nM、下游引物250nM‑500nM、探针100nM‑200nM、以及ALB基因特异性上游引物250nM‑500nM、下游引物250nM‑500nM、探针100nM‑200nM、2×Mastermix10μL、待测样本的基因组DNA10‑50ng,H<sub>2</sub>O补足体积20μL;(4)结果判定:将配制好的反应体系在荧光实时定量PCR仪上进行扩增,根据仪器给出的两基因的扩增指标进行结果判定。 |
地址 |
710075 陕西省西安市高新五路2号大学生物医药园 |