固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法

摘要

本发明涉及八肽胆囊收缩素的制备方法，尤其涉及固相法和液相法相结合合成八肽胆囊收缩素的方法。主要解决现有合成方法存在中间产物分离麻烦、制备周期长且反应中容易产生副产物、成本高、产率较低等技术问题。技术方案为：合成方法包括以下步骤：1）液相法合成L-天冬氨酰-4-叔丁基酯-苯丙酰胺；2）固相法合成八肽胆囊收缩素全保护片段；3）弱酸切割全保护片段；4)液相缩合全保护片段和二肽片段得到全保护八肽胆囊收缩素；5）切割：将全保护八肽胆囊收缩素加入切割液切割，然后加入冰乙醚沉淀得到八肽胆囊收缩素粗品；6）粗品通过高相液相色谱纯化，制备，旋蒸，冻干得到八肽胆囊收缩素精品。本发明用于八肽胆囊收缩素的制备。

主权项

固相法和液相法结合合成八肽胆囊收缩素的方法，其特征是具体包含以下步骤：   1）.液相法合成L‑天冬氨酰‑4‑叔丁基酯‑苯丙酰胺：将N‑(叔丁氧羰基)‑L‑苯基丙氨酸用有机溶剂溶解，然后C端酰胺化得到N‑(叔丁氧羰基)‑L‑苯丙酰胺,再和芴甲氧羰基‑天冬氨酸‑4‑叔丁脂加激活试剂反应，反应得到 N‑(9‑芴甲氧羰基)‑L‑天冬氨酰‑4‑叔丁基酯‑苯丙酰胺,然后用哌啶脱芴甲氧羰基保护,萃取，旋蒸，结晶得到L‑天冬氨酰‑4‑叔丁基酯‑苯丙酰胺； 2）.固相法合成八肽胆囊收缩素全保护片段：将N‑(9‑芴甲氧羰基)‑蛋氨酸用有机溶剂溶解加到二氯三苯基树脂中，再加有机碱，室温反应2‑3小时，完毕后，用甲醇封闭，用布氏漏斗过滤氨基酸树脂，再用二甲基甲酰胺、二氯甲烷、甲醇依次洗涤收缩，把做完的树脂放到固相反应器中，溶胀，然后加脱保护液脱保护，然后洗涤，加入片段的第二个具有芴甲氧羰基保护基团的氨基酸和激活试剂反应，控温反应1‑2个小时, 凯撒试验检测，反应完全后，脱芴甲氧羰基保护，依次往下偶联，最后得到八肽胆囊收缩素全保护片段肽树脂；3）.弱酸切割全保护片段：往八肽胆囊收缩素全保护片段肽树脂中加入适量的弱酸切割液，室温切割，得到八肽胆囊收缩素全保护片段； 4) .液相缩合全保护片段和二肽片段得到全保护八肽胆囊收缩素：八肽胆囊收缩素全保护片段与之前的L‑天冬氨酰‑4‑叔丁基酯‑苯丙酰胺，再加1‑羟基‑苯并‑三氮唑，以及N‑甲基吗啡啉和N,N‑二异丙基乙胺中的一种，冰浴下搅拌，加入缩合剂，反应后撤掉冰浴，室温搅拌过夜后得到全保护八肽胆囊收缩素； 5）.切割：将全保护八肽胆囊收缩素加入切割液切割，然后加入冰乙醚沉淀得到八肽胆囊收缩素粗品； 6）．粗品通过高相液相色谱纯化，制备，旋蒸，冻干得到八肽胆囊收缩素精品：采用C18类型的反相分离设备纯化八肽胆囊收缩素粗品。