一种研究白酒大曲微生物群落结构的生物化学方法

摘要

本发明涉及一种研究白酒大曲微生物群落结构的生物化学方法，即磷脂脂肪酸谱图技术，它是一种生物化学的方法。主要步骤如下：1)称取一定质量的大曲；2)加入提取液和有机溶剂，获得含有脂质的有机相；3)有机相经硅胶柱用有机溶剂进行洗脱；4)收集含有极性脂质的洗脱液；5)获得的洗脱液在弱碱条件下进行甲酯化反应，得到脂肪酸甲酯；6)用气相色谱-质谱联用仪对脂肪酸甲酯进行定性、定量；7)计算磷脂脂肪酸表征的活体微生物的生物量。这一发明为白酒大曲微生物群落结构及相关研究提供了一种准确、快速的技术手段，对大曲生产过程质量控制，提升和稳定白酒大曲质量水平有重要和实际意义。

主权项

一种研究白酒大曲微生物群落结构的生物化学方法，其特征在于包括以下步骤：a)选择用于分析的大曲样品；b)无菌条件下破碎后，称取5g大曲样品，加入15mL氯仿∶甲醇∶柠檬酸缓冲液＝1∶2∶0.8，V∶V∶V，避光静置过夜后，再分别加入7.5mL氯仿和7.5mL柠檬酸缓冲液，再次避光静置过夜，获得含有脂质的有机相；c)将步骤b)中所获得的有机相经硅胶柱，分别使用不同有机溶剂对不同类型脂质进行洗脱，并收集含极性脂质的洗脱液；d)将步骤c)中获得的含有极性脂质的洗脱液，在一定温度和弱碱性条件下进行甲酯化反应，获得脂肪酸甲酯，其中该步骤中加入的溶剂是1mL甲醇甲苯的1∶1体积比的混合液，1mL0.2mol/L氢氧化钾甲醇溶液，且在37℃水浴15min；e)将步骤d)中获得的脂肪酸甲酯，加入0.3mL1mol/L乙酸、2mL正己烷∶氯仿＝4∶1，V∶V的混合液和2mL无离子水，振荡分离，静置分层，提取有机相；f)将步骤e)中获得的有机相用高纯氮气吹干，加入含有一定量内标的有机溶剂中；g)使用气相色谱‑质谱联用仪对步骤f)中得到的溶液进行测定，得到样品中磷脂脂肪酸的种类和数量信息；h)由步骤g)所得到的数据计算表征活体微生物的生物量，获知大曲样品中微生物群落结构信息。