ИДЕНТИФИКАЦИЯ НИЗКОМОЛЕКУЛЯРНЫХ СОЕДИНЕНИЙ, РАСПОЗНАВАЕМЫХ АНТИТЕЛАМИ У ИНДИВИДУУМОВ С НЕЙРОДЕГЕНЕРАТИВНЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ

摘要

1. Способ ex vivo детекции антител в содержащем антитела образце, включающий:

(a) контактирование содержащего антитела образца с подложкой с закрепленным на ней пептоидом:

(i) формулы (1A)

где R¹ и R⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R², R³ и R⁵ независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила;

(ii) формулы (1B)

где R₆ выбран из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R⁷ и R⁸ независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила;

(iii) формулы (1C)

где R⁹, R¹¹ и R¹³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R¹⁰, R¹² и R¹⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила;

(iv) формулы (1D)

где R¹⁷-R²⁰ и R²³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R²¹, R²² и R²⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила

(v) формулы (1D),

где R¹⁷-R²⁰, R²³ и R²⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R²¹ и R²² независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила; или

(vi) формулы (1D),

где R^17, R¹⁹, R²⁰ и R²³ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_1-6алкила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; C_2-6алкинила, незамещенного или замещенного группой NH₂, OH или SH; лизила; карбоксила и гидроксильной группы; и

R¹⁸, R²¹ и R²⁴ независимо выбраны из группы, состоящей из C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила; и

где Z представляет собой связующую группу; L представляет собой необязательный линкерный фрагмент, M представляет собой субстрат или подложку и m, n, o и/или p равны 0-6;

(vii) формулы (2A)

где R²⁷ представляет собой алкиларильную группу или метилбензильную группу и

R²⁵, R²⁶, R²⁸-R³² независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила; или

(viii) формулы (2B)

где R³⁴ представляет собой алкиламин или N-бутиламин;

R³⁵ представляет собой алкенил, такой как аллильная группа, и

R³³, R³⁶ и R³⁸-R⁴⁰ независимо выбраны из группы, состоящей из водорода; алкила; аллила; метила; этила; н-пропила; изопропила; н-бутила; изобутила; н-бутиламина; втор-бутила; трет-бутила; пентила; гексила; изопентила; арила; гетероарила; фуранила; индолила; тиофенила; тиазолила; имидазолила; изоксазоила; оксазоила; пиперонила; пиразоила; пирролила; пиразинила; пиридила; пиримидила; пиримидинила; пуринила; циннолинила; бензофуранила; бензотиенила; бензотриазолила; бензоксазолила; хинолина; изоксазолила; изохинолина; циклоалкила; алкенила; циклоалкенила; фенила; пиридила; метоксиэтила; (R)-метилбензила; C_0-6алкиларила; C_0-6алкилгетероарила; C_1-6алкила, замещенного группой, выбранной из OH, SH, галогена, OR¹⁵, COOR¹⁵, NR¹⁵ (где R¹⁵ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкила или C_1-6алкинила) или R¹⁶ (где R¹⁶ выбран из группы, состоящей из H или C_1-6алкинила); OC_1-6алкила; C_2-6алкенила; C_2-6алкинила; C_2-6алкенила и C_2-6алкинила; и

Z представляет собой связующую группу; L представляет собой необязательный линкерный фрагмент, M представляет собой субстрат или подложку; и m, n, o и/или p равны 0-6; и

(b) детекцию антител, связавшихся с указанным пептоидом.

2. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию постановки диагноза болезни Альцгеймера (AD) у индивидуума, от которого получали указанный образец, если уровень антитела, связавшегося с пептоидом любой из формул (i)-(vi), превосходит уровень антитела, наблюдаемого у контрольных не подверженных заболеванию пациентов, или дополнительно включающий стадию постановки диагноза болезни Паркинсона у индивидуума, от которого получали указанный образец, если уровень антитела, связавшегося с пептоидом любой из формул (vii) и (viii), превосходит уровень антитела, наблюдаемого у контрольных не подверженных заболеванию пациентов.

3. Способ по п.1, дополнительно включающий стадию (с) принятие решения о лечении на основе результатов стадии (b).

4. Способ по п.2, где указанный пептоид выбран из группы, состоящей из

и

где Z представляет собой функциональную группу, способную к связыванию с линкером, субстратом или меткой.

5. Способ по п.1 или 3, где указанный образец контактируют более чем с одним пептоидом по п.1, имеющим любую из формул (i)-(viii), в частности где указанный образец контактируют с тремя структурно различными пептоидами формул (i)-(vi) или с тремя структурно различными пептоидами формул (vii) и (viii) и предпочтительно с пептоидами AD1, AD2 и AD3 или пептоидами PD1, PD2 и PD3.

6. Способ по п.1 или 3, где указанная подложка представляет собой гранулу, планшет, тест-полоску, фильтр, мембрану, иглу или лунку или где указанный образец представляет собой кровь, сыворотку, слюну или CSF.

7. Способ по п.1 или 3, где стадия детекции включает RIA, FIA, ELISA, вестерн-блоттинг, проточную цитометрию, FRET или поверхностный плазмонный резонанс.

8. Способ по п.1, где R²⁶, R²⁹, R³¹ и/или R³² представляют собой алкиламин или N-бутиламин, где R³⁰ представляет собой алкенильную или аллильную группу, где R³⁵ представляет собой аллильную группу или где R³⁷ представляет собой алкоксигруппу, такую как этоксигруппу.

9. Способ по п.1, где

содержащий антитела образец представлет собой сыворотку,

сыворотку подвергают воздествию множества пептоидов, имеющих любую из формул (i)-(vi), определенных в п.1, и

AD диагностируют у субъекта, у которого ожидается наличие AD, путем

детекции ассоциированного с AD антитела 1, связавшегося с пептоидом А, и, необязательно, детекции ассоциированного с AD антитела 2, связавшегося с пептоидом B.

10. Набор для детекции антител, характерных для нейродегенеративного заболевания, где набор содержит один или несколько пептоидов любой из формул (1A)- (1D), (2A) и (2B) со всеми переменными, как определено в п.1, необязательно связанными с субстратом.

11. Набор по п.10, где один или несколько пептоидов выбраны из любого из AD1, AD2, AD3, PD1, PD2 и PD3, как определено в п.4, и где Z также является таким, как определено в п.4.

12. Композиция, содержащая антитело, выделенное из сыворотки индивидуума с нейродегенеративным заболеванием, где антитело специфически связывает любой из AD1, AD2, AD3, PD1, PD2 и PD3, как определено в п.4, и где Z также является таким, как определено в п.4.

13. Набор для детекции антигенов, ассоциированных с болезнью Альцгеймера или болезнью Паркинсона, содержащий антитело, оределенное в п.12.

14. Антитело, выделенное стадиями, включающими:

(a) контактирование образца, содержащего антитело, характерное для нейродегенеративного заболевания, c иммуноаффинным субстратом, содержащим пептоид по п.1, который связывает антитела, характерные для нейродегенеративного заболевания;

(b) элюирование связанных антител с иммуноаффинного субстрата.

15. Композиция, содержащая пептоид, имеющий любую из формул (i)-(vi), как определено в п.1.

16. Пептоидная композиция, содержащая любой из AD1, AD2, AD3, PD1, PD2 и PD3, как определено в п.4, и где Z также является таким, как определено в п.4.

17. Композиция по п.15 или 16, дополнительно содержащая антитело, характерное для нейродегенеративного заболевания.

18. Выделенный пептоид, имеющий любую из формул (i)-(vi), как определено в п.1.

19. Выделенный пептоид по п.18, где пептоид представляет собой любой из D1, AD2, AD3, PD1, PD2 и PD3, как определено в п.4, и где Z также является таким, как определено в п.4.

20. Пептоид, где пептоид представляет собой любой из D1, AD2, AD3, PD1, PD2 и PD3, как определено в п.4, и где Z также является таким, как определено в п.4.

21. Способ детекции антитела в биологической жидкости, включающий стадии:

(a) инкубации панели пептоидов с блокирующим буфером, содержащим бактериальный лизат в концентрации от 0,5 до 2 мг/мл;

(b) удаления блокирующего буфера;

(c) инкубации панели пептоидов с раствором образца, содержащим бактериальный лизат; и

(d) детекции антитела, связавшегося с панелью пептоидов.