一种抗凝溶栓双功能融合蛋白的脂质体制剂及制备方法

摘要

本发明涉及生物制药领域，具体地说是涉及一种抗凝溶栓双功能融合蛋白——水蛭素12肽和瑞替普酶抗凝溶栓双功能融合蛋白(HV12p-rPA)的脂质体制剂及制备方法。由本研究室构建的抗凝溶栓双功能融合蛋白（HV12p-rPA），经结构鉴定、表达、层析复性及纯化和体外体内药效学实验，已证明具有抗凝和溶栓的双功效。本研究以其为原料药，制备其脂质体制剂，采用优化的薄膜分散-探头超声法制备脂质体，其特征是以磷脂与胆固醇比、蛋白药浓度、缓冲液体积、水浴超声时间为影响因素筛选最适合提高HV12p-rPA脂质体包封率的处方，并且以探头超声进一步减小均一其粒径，制得粒径在140~145nm可以用于静脉注射的HV12p-rPA脂质体。该方法制得的HV12p-rPA脂质体包封率达90%以上，且体外溶栓活性和体外抗凝活性分别为23810IU·mg-1、414ATU·mg-1。

主权项

一种抗凝溶栓双功能融合蛋白的脂质体制剂，由水蛭素12肽‑瑞替普酶抗凝溶栓双功能融合蛋白HV12p‑rPA被质量比为7:1~1:1的磷脂和胆固醇均匀分散成的膜，以下述方法包封而成：将质量比为7:1~1:1的磷脂和胆固醇完全溶解于医药中可以接受的有机溶剂后，挥干溶剂，使磷脂和胆固醇均匀分散成膜，然后加入pH值为5.0~8.0含有抗凝溶栓双功效融合蛋白HV12p‑rPA的缓冲液，经水浴超声混合成乳状液，再经超声探头在超声功率为25W~50W、间隔2s和累计超声5min~10min条件下超声减小粒径，得到所说的脂质体制剂。