一种以高效氯氟氰菊酯为底物的降解菌株的筛选方法

摘要

本发明属于生物降解农药残留领域，具体的说是一种以高效氯氟氰菊酯为底物的降解菌株的筛选方法。所述筛选方法为将采集的菌样富集驯化、筛选、分离纯化、强化得到以高效氯氟氰菊酯为唯一碳源生长的降解菌的方法。本发明提供的方法能高效，便捷地筛选出目的活性降解菌。为制备相关降解菌剂、酶制剂提供了菌种资源。

主权项

一种以高效氯氟氰菊酯为底物的降解菌株的筛选方法，其特征在于：1)菌样的富集驯化：将5‑10g菌样接种于含高效氯氟氰菊酯的80‑100ml富集培养基中进行转接培养，每次转接培养条件为25‑30℃、130‑200r/min摇床培养5‑10天，共转接4‑7次，转接培养按体积百分比计每次转接量为培养液的5‑10％，将其接种于含逐渐增加的高效氯氟氰菊酯的80‑100ml富集培养基中，待用；其中高效氯氟氰菊酯首次加入量25mg/L，而后以25‑50mg/L的增加量逐渐增加，菌样首次加入富集培养基中时同时加入10‑20粒玻璃珠；2)筛选：按体积百分比5‑20％的接种量将步骤1)中的富集培养菌液接种于含终浓度为50‑150mg/L高效氯氟氰菊酯的60‑100ml基础培养基中，进行转接培养，每次转接培养条件为25‑30℃下以130‑200r/min摇床培养5‑10天，共转接4‑7次，得到以高效氯氟氰菊酯为唯一碳源的混合菌液，待用；3)分离纯化：将筛选所得的以高效氯氟氰菊酯为唯一碳源的混合菌液稀释105‑109倍，涂布于普通培养基上，于25‑30℃培养2‑4天，分别挑取形态不同的菌落在普通培养基上划线纯化；4)强化：将步骤3)中分离纯化好的单一菌株划线到含终浓度为50‑150mg/L的高效氯氟氰菊酯的基础培养基平板上，在25‑30℃下培养3‑5天，得到以高效氯氟氰菊酯为底物的降解菌株；所述富集培养基为蛋白胨8‑10g，NaCl0.8‑1.0g，KH2PO4 0.8‑1.0g，葡萄糖1.0‑1.2g，H2O 1000ml，pH＝6.8‑7.2；所述基础培养基为NH4NO3 0.8‑1.0g，MgSO4·7H2O 0.4‑0.6g，(NH4)2SO40.4‑0.6g，NaCl0.4‑0.6g，KH2PO40.4‑0.6g，K2HPO41.2‑1.8g，FeCl30.005‑0.01g，H2O 1000ml，pH＝6.8‑7.2；所述普通培养基为牛肉膏4.0‑6.0g，蛋白胨8‑12g，NaCl4.0‑6.0g，琼脂15‑20g，H2O1000ml，pH＝7.0‑7.2。