一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 9的方法

摘要

本发明涉及一种生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 9的方法，尤其是一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Pera 9的方法，属于基因工程技术领域。本发明通过杆状病毒-昆虫表达系统生产美洲大蠊过敏原Per a 9蛋白，从而避免在不同的表达系统中(例如细菌和酵母菌)对Per a 9过敏原结构造成影响的问题，并提供一种亲和层析的方法，解决天然Per a 9过敏原纯化工艺复杂的问题。使用杆状病毒-昆虫表达系统得到的Per a 9蛋白的活性是使用大肠杆菌得到的Per a 9蛋白活性的2.1倍。

主权项

1.一种在杆状病毒-昆虫表达系统中生产美洲大蠊过敏原蛋白Per a 9的方法，其步骤包括：(1)从美洲大蠊组织中提取总RNA；(2)将总RNA反转录为cDNA，以cDNA为模板，用引物ATGGTGGACGCCGCAGTTCTGGA和TTAGAGCGAGCTCTCCAGCT进行PCR反应，获得美洲大蠊过敏原Per a 9蛋白的编码基因；(3)将Per a 9蛋白的编码基因克隆到杆状病毒载体中，转染昆虫细胞诱导表达Per a 9蛋白；(4)采用亲和层析方法对Per a 9蛋白进行纯化，从而得到美洲大蠊过敏原Per a 9蛋白。