主权项 |
1.一种脐带间充质干细胞的制备方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)无菌条件下取正常顺产或剖腹产者胎儿脐带,用含2%庆大霉素的生理盐水反复冲洗,去除残留血迹;(2)将脐带置于含2%庆大霉素的生理盐水中,用无菌剪刀将其剪切至约颗粒状,组织块置于50ml离心管内,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟,弃掉上清,重新加入含2%庆大霉素的生理盐水,将沉淀的组织块充分振荡,使之松散,高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟;(3)将步骤2所获的组织块用含10%胎牛血清的DMEM培养基悬浮,充分振荡后高速离心,离心机转速为2000转/分钟,离心10分钟;(4)将步骤3获得的组织块沉淀均匀种植于塑料细胞培养瓶中,置于5%CO2培养箱中,待组织块完全贴壁后,补加含10%胎牛血清的DMEM培养基;(5)于培养第10天在倒置显微镜下观察到组织块周围出现贴壁、梭型或多角型细胞时,将组织块全部吸出,补加含10%胎牛血清的DMEM培养基,置于5%CO2培养箱中继续培养1周;(6)待细胞80%融合,用0.25%胰酶消化,按1∶3传代;(7)经14~15天扩增后,细胞传至4~5代,得到间充质干细胞。 |