痕量二恶英生物检测方法

摘要

本发明提出了一种全新的二恶英检测方法，该发明根据二恶英与芳香受体所形成的复合物所具有的特异核酸结合特性，利用核酸扩增技术的高灵敏度建立起一种全新的二恶英痕量检测方法。二恶英与芳香烃受体形成的复合物能与特异核酸序列结合并保护其免受核酸外切酶III和核酸酶S1的降解，然后利用核酸扩增技术检测复合物结合保护的特异核酸序列，复合物结合的核酸序列与二恶英的量成比例关系。本发明方法简便易行，成本低，灵敏度高，可广泛用于环境样本和食品等中二恶英化合物的检测。

主权项

1.一种二恶英检测方法，包括以下步骤：(1)用以动物肝脏组织制备的含芳香烃受体(AhR)和芳香烃受体核转位子蛋白(ARNT)的细胞溶质作为二恶英的特异受体；(2)将含芳香烃受体(AhR)和芳香烃受体核转位子蛋白(ARNT)的细胞溶质与含二恶英化合物的待测样本共同孵育形成二恶英-AhR-ARNT复合物；(3)将所形成的二恶英-AhR-ARNT复合物与含有编码为GCGTG的DRE序列的DNA双链共同孵育，使DRE序列与二恶英-AhR-ARNT复合物结合；(4)用核酸外切酶III和核酸酶S1对含DRE序列的DNA进行水解，使未与二恶英-AhR-ARNT复合物结合的DRE序列DNA被水解，已与复合物结合的DRE序列DNA由于受到保护，不能被核酸外切酶III和核酸酶S1水解，得以保存；(5)用PCR检测因复合物结合而被保留的DNA片段，根据与二恶英-AhR-ARNT等组成的复合物结合而保留的DNA片段的量与其所结合的二恶英的量成比例关系的特点，采用2，3，7，8-四氯代二苯并二恶英(TCDD)制定标准曲线，然后根据此标准曲线计算得出待测样本中二恶英毒当量(TEQ量)。