PROCEDIMIENTO PARA DETECTAR SUSTANCIAS BIOLOGICAMENTE ACTIVAS.

摘要

LA PRESENTE INVENCION SE REFIERE A UN METODO PARA LA DETECCION DE UNA SUBSTANCIA BIOLOGICAMENTE ACTIVA QUE AFECTA A LOS PROCESOS INTRACELULARES, COMPRENDIENDO EL METODO: (A) EL CULTIVO DE UNA CELULA QUE CONTIENE UNA SECUENCIA DE ADN QUE CODIFICA PARA (I) UNA PROTEINA FLUORESCENTE VERDE (GFP) QUE TIENE UN SITIO DE RECONOCIMIENTO PARA LA PROTEINA QUINASA O (II) UNA PROTEINA FLUORESCENTE VERDE EN LA QUE UNO O MAS AMINOACIDOS HAN SIDO SUSTITUIDOS, INSERTADOS O DELECIONADOS PARA OBTENER UN DOMINIO DE UNION DE UN SEGUNDO MENSAJERO O UN SITIO DE RECONOCIMIENTO DE UNA ENZIMA O (III) UN POLIPEPTIDO HIBRIDO DE LA PROTEINA FLUORESCENTE VERDE (GFP) O UNA GFP MODIFICADA Y UN SITIO DE RECONOCIMIENTO PARA UNA ENZIMA O UN DOMINIO DE UNION PARA UN SEGUNDO MENSAJERO EN UNAS CONDICIONES QUE PERMITEN LA EXPRESION DE LA SECUENCIA DE ADN; (B) LA MEDICION DE LA FLUORESCENCIA DE LA CELULA; (C) LA INCUBACION DE LA CELULA CON UNA MUESTRA SOSPECHOSA DE CONTENER UNA SUBSTANCIA BIOLOGICAMENTE ACTIVA QUE AFECTA A LOS PROCESOS INTRACELULARES; Y (D) LA MEDICION DE LA FLUORESCENCIA PRODUCIDA POR LA CELULA INCUBADA Y LA DETERMINACION DE CUALQUIER CAMBIO EN LA FLUORESCENCIA EN COMPARACION CON LA FLUORESCENCIA MEDIDA EN EL PASO (B), SIENDO DICHO CAMBIO INDICATIVO DE LA PRESENCIA DE UNA SUBSTANCIA BIOLOGICAMENTE ACTIVA EN DICHA MUESTRA.