PROCEDIMIENTO DE SECUENCIACION DE NUCLEOTIDOS.

摘要

SE PROPORCIONA UN METODO PARA DETERMINAR LA IDENTIDAD DE AL MENOS DOS BASES DE NUCLEOTIDO UNICO DISCRETO CADA UNA ADYACENTE A UNA SECUENCIA DE BASE DE NUCLEOTIDO PREDETERMINADA EN UNA MUESTRA DIANA QUE COMPRENDE UNO O MAS TIPOS DE CADENA DE POLINUCLEOTIDO, EL METODO COMPRENDIENDO LA INCORPORACION DE UN GRUPO DE CAPTURA EN LA MUESTRA DIANA E INMOVILIZACION DE LA MUESTRA DIANA POR MEDIO DEL GRUPO DE CAPTURA; MEZCLA DE LA MUESTRA DIANA CON (I) INICIADORES DE NUCLEOTIDO QUE SON COMPLEMENTARIOS A LAS SECUENCIAS DE BASE CARACTERIZADAS DE MODO QUE FORTALEZCA LAS MISMAS EN POSICIONES ADYACENTES A LAS BASES A SER IDENTIFICADAS Y (II) AL MENOS DOS TIPOS DE TRIFOSFATO DE DIDEOXINUCLEOTIDO (DDNTP), CADA TIPO MARCADO CON UN GRUPO FLUORESCENTE DISTINGUIBLE, Y (III) UNA ENZIMA DE EXTENSION DE CADENA DE NUCLEOTIDO TAL QUE EL DDNTP COMPLEMENTARIO A LAS BASES A IDENTIFICAR SON INCORPORADAS A LOS INICIADORES DE NUCLEOTIDO; EXTRAER LOS INICIADORES DE NUCLEOTIDO EXTENSIBLES, SEPARAR LOS TIPOS DE INICIADOR DE NUCLEOTIDO EXTENDIDOS BASANDOSE EN EL TAMAÑO O CARGA E IDENTIFICAR LOS DDNTPS INCORPORADOS A CADA TIPO DE INICIADOR DE NUCLEOTIDO MEDIANTE REFERENCIA A LAS CARACTERISTICAS FLUORESCENTES ASOCIADAS A LOS GRUPOS DISTINGUIBLES. SE PROPORCIONAN INICIADORES Y UN KIT DE PRUEBA PARA USO EN LA REALIZACION DEL METODO.