一种基于磁珠与超声分离发光标记物的核酸检测方法

摘要

本发明涉及一种基于磁珠与超声分离发光标记物的核酸检测方法：该方法是在磁珠表面修饰功能化手臂分子；设计用于检测靶核酸片段的功能化探针，将功能化探针修饰于结合有功能化手臂分子的磁珠表面；通过杂交将靶核酸片段及其发光标记物捕获至磁珠表面；磁分离，清洗，得到已获取发光标记物的磁珠；通过超声波处理等物理方法将发光标记物从磁珠表面分离下来，对不含磁珠的发光标记物溶液进行发光检测，获取靶核酸信息。本发明不仅能克服磁珠对发光信号的遮蔽效应导致的发光信号损失，而且使用超声波处理等物理方式，可以避免化学或生物方法可能导致的试剂失活或其他干扰，在20μL体积中能够检测出最少50amol核酸片段，检测灵敏度高。

主权项

一种基于磁珠与超声分离发光标记物的核酸检测方法，该方法用于非诊断目的，其特征在于包括以下步骤：(1)在Fe₃O₄@SiO₂磁珠表面先进行氨基化修饰，再经过羧基化多聚物进行共价表面修饰，得到羧基化多聚物修饰的磁珠；所述羧基化多聚物是羧甲基葡聚糖或羧甲基纤维素；(2)设计用于检测靶核酸片段的功能化探针，该探针以3’端氨基修饰；将功能化探针与羧基化多聚物修饰的磁珠共价连接，得到连有特异性探针的功能化磁珠；(3)通过杂交，将靶核酸片段及其发光标记物捕获至磁珠表面；(4)磁分离，清洗，即得到已获取发光标记物的磁珠；(5)通过超声波处理方法将发光标记物从磁珠表面分离下来，即得到不含磁珠的发光标记物溶液；(6)对该溶液进行发光检测，即可获取靶核酸信息。