一种利用添加诱导物质提高黄杆菌合成维生素K₂（MK）产量的方法

摘要

本发明涉及一种利用添加诱导物质提高黄杆菌合成维生素K₂产量的方法，具体包括：黄杆菌菌株活化、黄杆菌种子培养、黄杆菌发酵培养、离心发酵液、冷冻干燥、甲醇处理等步骤，通过向发酵培养基中添加前体物质1,4-二羟基-2-萘甲酸、前体类似物VK₃或异戊烯醇(YWXC)作为诱导物质，促进MK的生物合成，将获得的抽提液进行检测。结果表明，与对照组相比，添加诱导物质的黄杆菌合成维生素K₂的产量显著提高，维生素K₂产量对菌体干重比也得到了较大幅度提高。该方法操作简单、可控性强、结果稳定，且安全环保。此外，利用添加诱导物质大大提高了黄杆菌合成MK的产量，为工业化大规模生产维生素MK提供新的思路和方式。

主权项

一种利用添加诱导物质提高黄杆菌合成MK产量的方法，其特征在于包括以下步骤：(1)黄杆菌菌株菌种活化：从冻存甘油管中挑取一环菌液采用划线稀释法划线或者稀释涂板法涂板于固体培养基的平板上，在25～37℃下倒置培养24～48h，挑取单菌落接种至含固体培养基的新鲜斜面上，继续保持温度倒置培养20～30h，所述固体培养基的成分包括10～40g/L麦芽糖、10～40g/L玉米浆、0.5～10g/L蛋白胨、0.2～2g/L酵母提取物、0.5～5g/L K₂HPO₄、0.5～5g/L NaCl、0.1～0.5g/L MgSO₄·7H₂O和15～20g/L琼脂粉。(2)黄杆菌菌株种子培养：挑取步骤(1)中生长成熟的斜面用接种环刮取一环菌苔接种于盛有50～100ml种子培养基的500ml三角瓶中，在25～37℃，100～200rpm振荡培养20～30h制得种子液，所述种子培养基成分包括10～40g/L麦芽糖、10～40g/L玉米浆、0.5～10g/L蛋白胨、0.2～2g/L酵母提取物、0.5～5g/L K₂HPO₄、0.5～5g/L NaCl和0.1～0.5g/L MgSO₄·7H₂O，且在110～130℃灭菌15～30min。(3)黄杆菌菌株发酵培养：按2～10％接种量将步骤(2)的种子液接种于盛有50～100ml发酵培养基的250ml三角瓶中，并在发酵0～96h始至此后的48小时内，将诱导物质1,4‑二羟基‑2‑萘甲酸2.5～50mg/L添加入发酵培养基，在25～37℃，100～200rpm振荡培养5～7天。所述发酵培养基成分包括30g/L麦芽糖、20g/L玉米浆、0.5～10g/L蛋白胨、0.2～2g/L酵母提取物、0.5～5g/L K₂HPO₄，0.5～5g/L NaCl和0.1～0.5g/L MgSO₄·7H₂O。