螺旋藻抗肿瘤多肽的双酶解制备方法

摘要

本发明提供螺旋藻抗肿瘤多肽的双酶解制备方法。该方法为：采用纯水，通过反复冻融、均质和超声获取螺旋藻全蛋白，通过碱性蛋白酶Alcalase 2.4和木瓜蛋白双酶解的方法，获取螺旋藻多肽，再利用超滤膜分离纯化，获得分子量大小范围为0-3K、3-5K，5-10K以及大于10K的螺旋藻多肽共4个组份。本发明得到的螺旋藻多肽和单肽组分，为抗肿瘤药物和保健食品的开发利用奠定了理论基础。

主权项

一种螺旋藻抗肿瘤多肽的双酶解制备方法，其特征在于，包括如下步骤：（1）取10~50 g螺旋藻粉，用超纯水配制成浓度为5% (w/v)的溶液，反复冻融2~5次后，冰浴中均质、超声，离心取上清液，冷冻干燥，备用；（2）取步骤（1）得到的螺旋藻蛋白配置成2~5%的蛋白液，加入碱性蛋白酶Alcalase2.4在控制条件下进行酶解，使用0.05～0.2 mol/L的NaOH和HCl来调节反应体系的pH值，控制pH值在pH±0.05之间，酶解完后再调节酶解条件，加入木瓜蛋白酶在控制条件下进行酶解，反应体系的pH值控制方法同上，酶解完毕后灭酶，冷却至室温，将酶解液离心，取上清液；（3）取步骤（2）得到的酶解液，依次用截留分子量分别为10 KD、5 KD以及3 KD的超滤膜过滤，从而获得分子量大小范围为0‑3 KD、3‑5 KD，5‑10KD和大于10 KD的螺旋藻蛋白酶解液；（4）取步骤（3）得到的0‑3K的酶解液进行葡聚糖凝胶Sephadex G‑15柱层析，水洗脱，按照出峰的时间顺序，收集得到6个多肽组分，分别命名为D1、D2、D3、D4、D5和D6，即螺旋藻抗肿瘤多肽。