传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗

摘要

本发明涉及传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗，属于生物制药领域。运用基因工程技术，构建含传染性法氏囊病病毒强毒株VP2基因的重组杆状病毒，用昆虫细胞培养方法高效表达病毒样颗粒重组VP2蛋白；应用淋巴细胞杂交瘤技术，建立分泌高中和效价的抗传染性法氏囊病病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株，用细胞培养或诱生BALB/c腹水的方法制备单克隆抗体。将病毒样颗粒重组VP2蛋白与单克隆抗体采用特定的方法制成传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合疫苗，这种新型疫苗对传染性法氏囊病具有预防和治疗双重功能，比单独使用疫苗和/或抗体效果更好，使用方便，具有巨大的生产及应用价值。

主权项

传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合双功能疫苗，是由特异性的传染性法氏囊病病毒样颗粒重组VP2蛋白与高效价中和活性单克隆抗体组成的，其制备方法为：1)传染性法氏囊病病毒样颗粒重组VP2蛋白的制备用RT‑PCR方法扩增IBDV强毒株VP2基因，定向克隆入杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBacHTA中，构建重组供体质粒pFastBacHTA‑VP2，转化Escherichia coli DH10Bac感受态，筛选重组杆状病毒表达质粒pBac‑VP2；用pBac‑VP2转染Sf9昆虫细胞，获得重组杆状病毒vBac‑VP2；2)传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合疫苗的制备将2体积的质量体积比10％硫酸铝钾溶液与1体积1mol/L的碳酸氢钠溶液震荡混合，取沉淀物，加入1体积含ELISA效价≧1600的IBDV病毒样颗粒重组VP2蛋白饱和PBS缓冲液，4℃感作12h，再加入1体积中和效价≧2¹¹的IBDV单克隆抗体mAb，4℃感作12h，获得氢氧化铝胶‑VP2‑mAb组合物，用SDS‑PAGE分析该组合物的质量合格后，再加入抗体稳定剂，制成传染性法氏囊病病毒样颗粒与单克隆抗体组合疫苗，4℃存放，备用；其中IBDV单克隆抗体是由保藏编号为CCTCC NO：C201322的杂交瘤细胞C128株制备而成的。