主权项 |
一种黄连木芽染色体制片的方法,其特征是:A、取材:每年四月中上旬上午9‑10时取黄连木树上新生的嫩芽,沿嫩芽腹线切割成两部分;B、预处理:将切割好的嫩芽用蒸馏水清洗干净,吸水纸吸干水分后放入浓度为0.002 mol/L的8‑羟基喹啉溶液中,在暗处预处理2 h 50 min;C、固定:将预处理后的嫩芽用吸水纸吸干,除去残余的预处理液后放入卡诺氏Ⅰ固定液中,在4℃冰箱中固定2 h 20 min,固定好后的材料转入70%乙醇中保存备用;D、酶解:将固定好的嫩芽用蒸馏水漂洗3次,每次10 min,吸干水分后放入2%纤维素酶溶液中,在30℃水浴锅中酶解40 min;E、再固定:将酶解后的嫩芽再用卡诺氏Ⅰ固定液固定20 min;F、解离:将再固定后的材料放入1 mol/L盐酸溶液中,在60℃水浴锅中解离5 min,解离后用蒸馏水漂洗2次,每次5 min;G、染色:将解离后的嫩芽置于载玻片上,取呈现出乳白色的组织块,用吸水纸吸干组织块周围的水分,用解剖刀将取下的组织块切割成碎块,滴入1‑2滴卡宝品红染色剂,染色15 min,然后用蒸馏水漂洗;H、压片:将材料重新移至载玻片上,捣碎组织块,并使其均匀分散在载玻片上,盖上盖玻片,置于酒精灯上微热,使细胞进一步软化和增强染色,静置片刻,在盖玻片上放一张滤纸,并用左手食指压紧,右手持带橡皮的铅笔的橡皮头端先轻后重的敲击盖片,使细胞压平,然后放置在平整的桌面上,用拇指压紧盖玻片;I、镜检:将压片置于生物显微镜下观察,选择染色体分散、清晰的细胞在显微摄影装置下进行显微照相,以便进行染色体计数,同时用记号笔在载玻片和盖玻片上分别做记号。 |