一种以DNA聚合酶δ为靶标筛选化疗药物及药效的方法

摘要

本发明涉及一种以DNA聚合酶δ为靶标筛选化疗药物的方法，属于生物化学与细胞分子生物学领域。方法为：确定出由Calpain激活途径介导的肿瘤细胞凋亡，以DNA聚合酶δ/p12为靶标，快速评价某种化疗药物对特定肿瘤细胞的杀伤效率。优点为：结合市场可购买的检测细胞凋亡、Calpain和Caspase-3活性的常规试剂盒，通过检测DNA聚合酶δ各个亚基在不同细胞凋亡途径中不同时间的变化，以DNA聚合酶δ作为细胞凋亡的一个新靶标，方便准确地判断某种肿瘤化疗药物的药效，本发明特别适用于Calpain激活途径介导癌细胞凋亡的化疗药物筛选。

主权项

一种以DNA聚合酶δ为靶标筛选化疗药物及药效的方法，按照下述步骤进行：（1）介导癌细胞凋亡途径的确定：首先，在用细胞培养瓶体外培养的癌细胞培养基中添加待筛选的化疗药物，收集药物处理后不同时间的细胞，以细胞凋亡试剂盒检测并确定何种药物具有诱导癌细胞凋亡的功效，同时，确定发生癌细胞凋亡是由Caspase‑3激活途径还是由Calpain激活途径所介导的；（2）DNA聚合酶δ在不同细胞凋亡途径中的行为变化：收集不同时间点、对应于步骤（1）中所处不同凋亡途径介导的癌细胞，裂解细胞，高速离心后取上清进行SDS‑PAGE电泳并转膜，以分别抗DNA聚合酶δ四种亚基的抗体进行Western blot分析，分别检测四种亚基p125、p50、p68和p12在不同凋亡途径中凋亡早期和凋亡晚期的特征变化，确定DNA聚合酶δ是某种细胞凋亡途径的一个新靶标。