一种千层塔原叶体诱导和增殖方法

摘要

本发明公开了一种千层塔原叶体诱导和增殖方法。该方法以孢子囊或孢子作为外植体，进行离体组织培养，并建立了千层塔原叶体的诱导体系，原叶体的诱导频率达到15%，在人工调控下，对原叶体进行增殖培养，月增殖倍数达到5倍。方法简单易行，效率高，为千层塔的人工快速繁殖建立重要的技术基础。

主权项

一种千层塔原叶体诱导和增殖方法，其特征在于，按以下步骤进行：（1）外植体的选择从野外采集蛇足石杉的孢子囊，经自来水冲洗干净；（2）外植体的表面灭菌将洗干净的孢子囊在超净工作台中先浸在质量分数为70%的乙醇溶液中30s~60s；接着置于浓度0.1%的HgCl2溶液中浸泡5min ~8min，再用无菌水冲洗3‑5次，将孢子囊或者孢子囊破裂后从中散出的孢子作为千层塔原叶体诱导的外植体；（3）原叶体的诱导培养将得到的外植体接种在原叶体诱导培养基上，在培养温度为22±2℃、光照时间12/d~16/d、光照强度为300 Lx~2000 Lx条件下培养10‑12周，从外植体上长出绿色的原叶体组织；（4）原叶体的增殖将步骤（3）中获得的原叶体组织切割成0.2cm2~0.5cm2的小片，然后转入原叶体增殖培养基上继续培养，培养条件与步骤（3）中相同，培养6周后，获得大量的新增殖的原叶体。