一种血管紧张素酶抑制肽体外活性的检测方法

摘要

本发明涉及一种体外直接测定血管紧张素酶(ACE)抑制肽活性的高效液相色谱(HPLC)分析方法，属生物技术领域。本方法以茄参(Acaudina Molpadioidea)胶原肽作为ACE抑制肽，通过多次试验，得出一种直接进样、等度洗脱便能达到良好分析效果的HPLC测定该抑制肽体外活性的方法。该方法经验证，也适用于其他水产胶原ACE抑制肽体外活性的检测，具有操作简便、重复性好、灵敏度和准确性高等特点。

主权项

一种血管紧张素酶抑制肽体外活性的检测方法，取ACE抑制肽溶液30～40ul，加入到20～40ul 25mU/ml的ACE溶液中，在37℃下保温4～5min后加入30～50ul的HHL溶液开始反应，在37℃条件下反应30～60min后加入150～200ul 1.0mol/L的HCl中止反应，得到反应液；同时用30～40ul pH8.3的硼酸缓冲液替代ACE抑制肽溶液来制备反应液，作为空白对照组；反应液经过0.45um滤膜过滤后用HPLC进行分析，其色谱条件为：4.6×200mm，填料粒径5um的Zorbax SB‑C18分析柱，柱温25℃，流动相为体积比1∶1，各含0.05％三氟乙酸的乙腈和超纯水，流速0.4ml/min，检测波长228nm，进样量10ul～20ul。