文心兰离体叶片诱导体胚的方法

摘要

本发明公开了从文心兰离体叶片诱导体胚并最终获得再生植株的方法，属于生物技术和现代农业技术领域。本发明以文心兰（Oncidiumflexuosum）“百万金币”无菌苗叶片为外植体，培养基为添加TDZ、6-苄基腺嘌呤和细胞激动素的改良1/2MS培养基，24-26℃暗培养50-60天，90%以上的叶片能诱导生成体胚，体胚发生的位置在叶尖、叶切口、叶面和叶缘，这些体胚均能进一步发育成类原球茎（PLBs），最终获得正常的再生植株。采用本发明建立的文心兰离体叶片-体胚-植株再生体系，为文心兰育种提供了大量源于叶片的胚性单细胞，这些能形成体胚-类原球茎并可获得再生植株的胚性单细胞是转基因育种工程的最佳受体细胞。

主权项

一种从文心兰离体叶片高效诱导体胚的方法，其特征在于以取自文心兰（Oncidium flexuosum）“百万金币”无菌幼苗的离体叶片为外植体，培养基为添加TDZ（噻苯隆，thidiazuron）、6‑苄基腺嘌呤和细胞激动素的改良1/2MS培养基，20‑28℃暗培养50‑60天，绝大部分叶片可诱导生成体胚，继续培养可形成类原球茎，并最终获得正常的再生植株。