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<p>Procédé d'extraction et de purification de protéines, telles que la β(1→4)glycanohydrolase (hyaluronidase), en particulier à partir des déchets solides issus du traitement de crustacés marins tels que les décapodes qui comprennent les groupes Natantia et Reptantia tels que les stomatopodes, les crevettes, les homards et les crabes. Ladite enzyme est extraite en solution par homogénéisation des déchets de têtes avec du sucrose 0,25 M et ensuite par précipitation de ladite solution par ajout d'un solvant organique tel que l'acétone ou d'autres agents de précipitation tels que du polyéthylène glycol à poids moléculaire élevé. Cet extrait d'enzyme dissous dans un volume approprié de tampon d'acétate de sodium 10 mM à un pH de 5,4, contenant du chlorure de potassium 10 mM (ou du chlorure de sodium) est soumis à la chromatographie sur résine échangeuse d'anions AmberliteTM IRA 420 et éluée sélectivement par le fait que la colonne chargée est soumise à un gradient en augmentation constante d'ions de chlorure. L'éluant est un tampon d'acétate de sodium 10 mM à un pH de 4,5, qui contient une concentration de départ de chlorure de potassium 10 mM (ou de chlorure de sodium) augmentant de manière constante jusqu'à 500 mM. Les fractions éluées de la colonne qui présentent une activité enzymatique sont réunies et concentrées par anti-dialyse pour produire une forme hautement purifiée et concentrée de hyaluronidase convenant aux applications alimentaires et/ou biomédicales. Cette préparation enzymatique purifiée est ensuite soumise à une phase finale de polissage sur une colonne de chromatographie sur gel SephacrylTM S-300-HR avec un tampon acétate de sodium 10 mM à un pH de 4,5, contenant du chlorure de potassium 10 mM (ou du chlorure de sodium) et 1 % de glycérol. Le produit élué résultant contenant l'enzyme est rassemblé et concentré par anti-dialyse contre 50 % de polyéthylène glycol (PEG) 6000 dans de l'eau désionisée pour produire une forme hautement purifiée et concentrée de ladite enzyme convenant à des applications thérapeutiques ou alimentaires.</p> |
