奶粉中三种脂溶性维生素A,E和K1的检测方法

摘要

本发明公开了奶粉中三种脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法。称取样品加水溶解定容，取部分定容后的样品溶液于离心管中，加入无水乙醇、正己烷、饱和氯化钠溶液，混匀后离心分层，取正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容，将其和标准工作溶液在液相色谱‑串联质谱仪检测，分别进样，获得以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁的浓度为横坐标，6种维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线；用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种维生素的浓度；经过换算即得到维生素A，维生素E和维生素K₁的含量。本发明的方法简便、快速、准确、灵敏度高。

主权项

一种奶粉中脂溶性维生素A,E和K₁的检测方法，其特征在于，步骤为，样品制备：称取样品于比色管中，加入温水溶解定容至刻度后，取部分定容后的样品溶液于离心管中，加入无水乙醇沉淀蛋白，再加入正己烷提取，加入饱和氯化钠溶液抑制乳化，混匀后高速离心分层，取最上面的正己烷层氮气吹干后，用甲醇溶解定容，经0.22μm滤膜过滤后即可；样品检测：将待测样品和标准工作溶液在液相色谱‑串联质谱仪检测，分别进样，获得以标准工作溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的浓度为横坐标，再以标准溶液中维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯、维生素E、维生素E醋酸酯、维生素K₁这6种脂溶性维生素的峰面积为纵坐标的工作曲线；用工作曲线对定量离子进行定量计算获得待测样品溶液中6种脂溶性维生素的浓度；维生素A以维生素A、维生素A醋酸酯、维生素A棕榈酸酯换算成维生素A的总量计算，维生素E以维生素E、维生素E醋酸酯换算成维生素E的总量计算；具体换算方法如下： C_维生素K1＝C_维生素K1；其中C_维生素A表示维生素A的浓度，C_{维生素A醋酸酯}表示维生素A醋酸酯的浓度，以此类推；即得到待测样品的维生素A、维生素E、维生素K₁的浓度；所述液相色谱‑串联质谱仪的检测为，选用水‑乙腈为流动相，反相液相色谱柱分离，采用大气压化学电离串联质谱进行检测，正离子扫描模式，多反应监测MRM检测，外标法定量；色谱条件：Phenomenex Kinetex C₁₈色谱柱,100×4.6mm i.d.，粒径2.6μm；柱温35℃；流速1.0mL/min；进样量5μL；流动相为水和乙腈，梯度洗脱程序：0‑4.0min，90％乙腈；4.1‑18.0min，100％乙腈；18.1‑22.0min，90％乙腈；质谱条件：离子源为大气压化学电离源；扫描方式为正离子扫描；检测方式为多反应监测；喷雾气65psi，气帘气30psi，碰撞气medium，离子源温度350℃，电流入口电压和出口电压均为10V，驻留时间50ms；监测离子对:维生素A为269.2/92.9和 269.2/213.1、维生素A醋酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素A棕榈酸酯为269.2/92.9和269.2/213.1、维生素E为431.4/137.1和431.4/165.1、维生素E醋酸酯为473.4/165.1和473.4/207.1、维生素K₁为451.4/171.1和451.4/187.1；化合物保留时间:维生素A为2.33min、维生素A醋酸酯为3.48min、维生素A棕榈酸酯为16.50min、维生素E为8.01min、维生素E醋酸酯为8.77min,维生素K₁为9.70min；去簇电压：维生素A为98V、维生素A醋酸酯为62V、维生素A棕榈酸酯为82V、维生素E为168V、维生素E醋酸酯为201V,维生素K₁为227V；碰撞能量:维生素A为26V和17V、维生素A醋酸酯为26V和17V、维生素A棕榈酸酯为26V和17V、维生素E为61V和27V、维生素E醋酸酯为50V和24V、维生素K₁为41V和32V。