一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法

摘要

一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法。本发明公开了一种基于高效液相色谱法(HPLC)测定茶树嫩芽内源激素含量的方法，通过优化流动相组成及浓度、流速，及有机改良剂的添加比例、检测波长等条件，确定HPLC测定茶树嫩芽内源激素含量的最佳色谱条件，考察了该方法的重现性和精密度。本发明方法具有高速、高效、高灵敏度、高自动化的特点，主要解决了在利用高效液相色谱法测定茶树顶芽激素时，探索茶树顶芽样品前处理方法、流动相的选择和色谱条件，对成功利用HPLC测定植物激素提供一种可靠快速方法。

主权项

一种茶树嫩芽内源激素含量的测定方法，其特征在于：包括以下步骤：1)样品收集冷冻与预处理；具体方法为：1‑1)浸提：称取冷冻的茶树嫩芽样品，加入80％冷甲醇研磨，置于4℃下静置16h后，抽滤得粗提液；1‑2)一次萃取：将步骤1‑1)所得粗提液用等量石油醚萃取，弃去醚相，保留水相；1‑3)旋转蒸发：将步骤1‑2)所得水相在37℃下旋转蒸发至溶液体积的1/4至1/5；1‑4)调节pH：将步骤1‑3)所得旋蒸浓缩液调节pH至8.0，加入PVP，过滤，用0.3mol/L酒石酸溶液调节pH至3.5；1‑5)二次萃取：将调好pH值的溶液用等量乙酸乙酯萃取，收集水相，合并酯相；1‑6)酯相收集：将步骤1‑5)所得酯相在37℃下旋转蒸干，溶解于甲醇，通过0.45μm滤膜抽滤，滤液保存于4℃下棕色瓶中，待测；1‑7)水相收集：将步骤1‑5)所得的水相调节pH至8.0，用等量饱和正丁醇萃取得有机相，在60℃下旋转蒸发，溶解于甲醇，离心，滤液保存于4℃下棕色瓶中，待测；2)配置流动相及设置色谱条件：所述流动相为将甲醇与0.075％冰乙酸溶液分别进行抽滤及超声波震动30min，按体积比为45:55配制；所述色谱条件为流速0.7mL/min，检测波长210nm和254nm，柱温25℃，进样量20μL；3)配置标准溶液并建立回归方程，所述标准溶液包括0.1g/L的IAA标准液、0.001g/L的ZT标准液、0.001g/L的ABA标准液和0.01g/L的GA₃标准液；4)样品待测溶液检测。