基于苝激基缔合物的甲基化酶活性的检测方法及其甲基化酶抑制剂的筛选方法

摘要

本发明提供基于苝激基缔合物的甲基化酶活性的检测方法及其甲基化酶抑制剂的筛选方法，属于生物技术领域。该方法先制备双链DNA，然后将双链DNA与S-腺苷甲硫氨酸、限制性内切酶和不同浓度的甲基化酶反应，得到混合溶液；将末端脱氧核苷酸转移酶、脱氧核糖核苷三磷酸和TdT反应缓冲液与混合溶液反应，得到反应溶液；最后将苝衍生物探针与聚阳离子的混合溶液和反应溶液反应，对甲基化酶的活性进行荧光检测。本发明还提供一种甲基化酶抑制剂的筛选方法。本发明利用小分子探针单体与激基缔合物荧光强度比值的变化来检测甲基化酶和抑制剂的活性，测试给出的是两个荧光信号的比值，比起单纯荧光增强或减弱的信号，不易受到干扰，灵敏度更高。

主权项

一种基于苝激基缔合物的甲基化酶活性的检测方法，其特征在于，包括如下：步骤一：制备双链DNA；步骤二：将步骤一得到的双链DNA与S‑腺苷甲硫氨酸、限制性内切酶和不同浓度的甲基化酶反应，得到混合溶液；步骤三：将末端脱氧核苷酸转移酶、脱氧核糖核苷三磷酸和末端脱氧核苷酸转移酶反应缓冲液与步骤二得到的混合溶液反应，得到反应溶液；步骤四：将苝衍生物探针与聚阳离子的混合溶液和步骤三得到的反应溶液反应，对甲基化酶的活性进行荧光检测，同时记录荧光光谱的I_M/I_E值，I_M/I_E值随着甲基化酶浓度的对数值线性增加，以此检测甲基化酶的活性；I_M为探针单体的荧光强度，I_E为激基缔合物的荧光强度。