一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法

摘要

本发明公开了一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法，以烟草突变群体的DNA序列为模板，设计NtGt1a基因特异性引物，通过PCR仪进行扩增，扩增后PCR产物首先高温变性，缓慢降低温度复性，然后利用限制性内切酶CELI进行酶切，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序，将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对，确定发生突变的类型，本发明的检测方法具有准确快速，易操作，重复性高，通量大的优点。

主权项

一种烟草NtGt1a基因单碱基替换突变的检测方法，其特征在于：以烟草突变群体的DNA序列为模板，设计NtGt1a基因特异性引物，通过PCR仪进行扩增，扩增后PCR产物首先高温变性，缓慢降低温度复性，然后利用限制性内切酶CELI进行酶切，对酶切产物进行琼脂糖凝胶电泳检测，对酶切后产生3条电泳带的最高分子量电泳条带进行测序，将测序结果与NCBI发布的NtGt1a序列进行比对，确定发生突变的类型，所述的烟草NtGt1a基因特异性引物为：上游引物NtGt1a‑F: 5’ – CAACCTGAGACCTCTGTTAGTATG ‑3’   24bp下游引物NtGt1a‑R: 5’ – CCTTCTAATAACGCTGCTCTACT ‑3’    23bp    。