不对称病毒纳米颗粒的制备方法

摘要

本发明公开了一种不对称病毒纳米颗粒的制备方法。该方法为：对病毒衣壳蛋白表面进行基因改造，使病毒衣壳蛋白同时带有耦合的功能基团和分离基团，然后将该改造后的病毒衣壳蛋白与野生型病毒衣壳蛋白充分混合，并控制该两种病毒衣壳蛋白的比例，同时根据病毒衣壳蛋白总量加入相应无机纳米粒子，实现病毒纳米颗粒的可控组装，获得不对称功能化的纳米颗粒，即目标产物。本发明选用生物大分子-蛋白质作为纳米材料，其容易改造和人为操纵，且方便大量获取。利用可自组装的病毒衣壳蛋白结构的对称性，可以将两种不同的蛋白分子混合后按预先设计进行定向组装,因此组装体具有多样性和可控性；反应条件易控制，并且可以实现大规模生产。

主权项

一种不对称病毒纳米颗粒的制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：ⅰ.在SV40衣壳蛋白的VP1 Loop中引入Cys，即，在第74位氨基酸突变为Cys，并在第139位插入His‑tag，构建载体，并在生物体中实现表达，经Ni²⁺‑‑‑NTA 亲和层析柱纯化，获得改造后的病毒衣壳蛋白； ⅱ. 将浓度为680 ug/mL的原野生型SV40衣壳蛋白wtvp1与浓度为330 ug/mL的改造后的病毒衣壳蛋白混合，加入浓度为3.24 uM的量子点CdSe，原野生型SV40衣壳蛋白wtvp1、改造后的病毒衣壳蛋白以及量子点CdSe的体积比为25:4.7:1.67，在低盐溶液中透析完成共组装；ⅲ. 采用镍亲和层析法，首先以15‑30 mM咪唑溶液除去不带有改造后的病毒衣壳蛋白的组装产物，即无功能基团和分离基团的病毒纳米颗粒；然后取200~1000 mM咪唑溶液洗脱得到组装产物中只含有一个改造后的病毒衣壳蛋白单元的病毒纳米颗粒，即不对称病毒纳米颗粒，所述不对称病毒纳米颗粒具有正二十面体结构，其外壳是由1个His‑mVP1五聚体和11个wtvp1五聚体组成，中心是量子点CdSe。