减低蛇毒神经生长因子免疫毒性使之成为鼠源神经生长因子的药物替代品的方法

摘要

本发明通过结构生物学和生物化学研究发现来自眼镜蛇的神经生长因子(cNGF)特异结合脂类小分子，是其免疫毒性的主要来源之一。因此，本发明涉及眼镜蛇毒神经生长因子(cNGF)的纯化方法和脱脂方法，利用有机溶剂采取特殊工艺对纯化的cNGF进行处理，成功地去除了脂类小分子，并通过细胞实验证实脱脂后的cNGF减少了对小鼠肥大细胞瘤细胞的免疫毒性，可作为鼠源神经生长因子的替代药物作为低副作用具有神经营养作用的药物。

主权项

眼镜蛇毒神经生长因子cNGF的纯化方法，所述方法包括下述步骤：(1)将蛇毒粗品溶解于醋酸钠溶液，(2)将步骤(1)的溶液进行第一步离子交换层析，所用缓冲液A液B液均为磷酸钠缓冲液，B液中洗脱盐为氯化钠，各洗脱组分经SDS‑PAGE验证，将目的蛋白溶液浓缩；(3)将步骤(2)的浓缩蛋白溶液换至第二步离子交换层析缓冲液，进行第二步离子交换层析，所用缓冲液A液B液均为磷酸钠缓冲液，B液中洗脱盐为氯化钠，各洗脱组分经SDS‑PAGE验证，将目的蛋白溶液浓缩；和(4)将步骤(3)的浓缩蛋白溶液进行分子筛层析。