一种利用硅胶膜从多糖多酚植物中提取总核糖核酸的方法

摘要

本发明涉及一种利用硅胶膜从多糖多酚植物中提取总核糖核酸的方法，属于核酸纯化领域。首先向液氮研磨的多糖多酚植物材料加入多糖多酚植物裂解液，对混合物进行离心分离，取出离心分离的上清液，转入过滤柱中进行过滤，向滤液中加入无水乙醇后混匀，转入硅胶膜吸附柱中，进行吸附离心，加入去蛋白液和脱氧核糖核酸酶溶液，进行两次去蛋白离心，加入漂洗液进行脱盐离心，最后干燥离心后，加入无核糖核酸酶的水洗脱离心，得到核糖核酸溶液。本发明方法具有高效、快速、简洁的特点，纯化的RNA可用于芯片分析、体外翻译和分子克隆等等多种下游实验。

主权项

1.一种利用硅胶膜从多糖多酚植物中提取总核糖核酸的方法，其特征在于该方法包括以下各步骤：（1）向50～100毫克经液氮研磨的植物组织中加入500微升多糖多酚植物裂解液，涡旋剧烈震荡混匀；所述的多糖多酚植物裂解液中的各组分为：将上述各组分称重后混合，加去离子水，使混合液体积为1000毫升；（2）将上述混合物室温放置5分钟后进行离心分离，离心分离的转速为12000转/分钟，离心分离时间为2分钟，取出离心分离的上清液；（3）将步骤（2）中的上清液转入过滤柱中，进行过滤离心，离心过滤时间为1分钟，吸取收集管中的上清液至无核糖核酸酶的离心管中；（4）在步骤（3）的溶液中加入200微升无水乙醇，混匀后转入硅胶膜吸附柱中，进行吸附离心，离心吸附的转速为12000转/分钟，离心吸附时间为1分钟，倒去废液；（5）向步骤（4）的硅胶膜吸附柱中加入350微升去蛋白液，进行第一次去蛋白离心，去蛋白离心转速为12000转/分钟，去蛋白离心时间为15秒，倒去废液；（6）向步骤（5）的硅胶膜吸附柱中加入活性单位为0.375库尼茨的脱氧核糖核酸酶溶液80微升，室温下放置15分钟后，再加入350微升去蛋白液，进行第二次去蛋白离心，去蛋白离心转速为12000转/分钟，去蛋白离心时间为15秒，倒去废液；（7）向步骤（6）的硅胶膜吸附柱中加入500微升漂洗液，室温下静置2分钟，进行脱盐离心，脱盐离心的转速为12000转/分钟，脱盐离心时间为15秒，倒去废液；重复该步骤一次；（8）对步骤（7）的硅胶膜吸附柱进行干燥离心，干燥离心的转速为12000转/分钟，干燥离心时间为2分钟，将吸附柱置于室温下2～5分钟，去除吸附材料中的漂洗液；（9）在步骤（8）的硅胶膜吸附柱中加入30～50微升无核糖核酸酶的水，室温下放置2分钟后，进行洗脱离心，洗脱离心的转速为12000转/分钟，洗脱离心时间为2分钟，得到核糖核酸溶液。