倾向水解TAG sn-2位酯键酶工程菌及相应重组脂肪酶的构建法

摘要

本发明公开了一种倾向水解TAGsn-2位酯键酶工程菌的构建方法，包括以下步骤：1)CAL-A基因的克隆；2)重组载体的构建：利用限制性内切酶对PCR产物和载体进行双酶切、连接，构建重组载体；然后将重组载体转化进入大肠杆菌中，通过PCR鉴定，筛选出阳性重组载体；3)转化：将阳性重组载体采用限制性内切酶进行线性化，并将其电转进入宿主菌中；然后采用PCR鉴定，筛选出阳性工程菌。本发明还同时提供了利用上述方法所得工程菌制备重组脂肪酶的方法。本发明所得的重组脂肪酶能用于水解甘油三酯食用油。

主权项

一种倾向水解TAG sn‑2位酯键酶工程菌的构建方法，其特征是包括以下步骤：1)、CAL‑A基因的克隆：以南极假丝酵母基因组为模板，利用一对特异性引物进行PCR扩增；所述特异性引物的上游引物和下游引物分别如下：上游引物：AATAAGGAATTCGCGGCGCTGCCCAACCCCTACGAC  ，下游引物：AAGGAAAAAAGCGGCCGCCATCGACCGTGGGAACTG  ；2)、重组载体的构建：利用限制性内切酶对PCR产物和载体进行双酶切、连接，构建重组载体，所述载体为pPIC9K；然后将上述重组载体转化进入大肠杆菌中，通过PCR鉴定，筛选出阳性重组载体；3)、转化：将上述阳性重组载体，采用限制性内切酶进行线性化，并将其电转进入宿主菌中，所述宿主菌为毕赤酵母菌GS115；然后采用PCR鉴定，筛选出阳性工程菌。