一种温敏含糖嵌段聚合物及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种温敏含糖嵌段聚合物及其制备方法和辅助溶菌酶复性的用途。该方法首先用I₂/KOH将麦芽七糖氧化成酮式麦芽七糖，然后以二氨基乙硫醇盐酸盐作链转移剂，通过N-异丙基丙烯酰胺单体的自由基均聚合得到胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)，最后通过酮式麦芽七糖与端氨基聚(N-异丙基丙烯酰胺)间的偶联反应制备得到温敏含糖嵌段聚合物。本发明温敏含糖嵌段聚合物具有随温度变化的可逆自组装特性，利用温敏含糖嵌段聚合物的这种温度敏感特性，它可以用来辅助溶菌酶复性，溶菌酶活性收率可达80％，是不使用温敏含糖嵌段聚合物时的2倍。该温敏含糖嵌段聚合物将在生物医药领域有着广泛应用前景。

主权项

1、一种温敏含糖嵌段聚合物的制备方法，其特征在于包括如下步骤：(1)酮式麦芽七糖的制备：搅拌下将碘的甲醇溶液滴加到麦芽七糖水溶液中，所述麦芽七糖水溶液的浓度在0.4～0.5g/ml之间，麦芽七糖和碘的物质的量比为1∶2～3，碘的甲醇溶液与麦芽七糖水溶液的体积比为1∶0.25～0.27；然后将所得混合液升温到40～45℃，并继续滴加氢氧化钾的甲醇溶液，所加入氢氧化钾的甲醇溶液是碘的甲醇溶液体积的2倍，其中氢氧化钾的物质的量是碘的物质的量的2～3倍，滴加完毕后继续保温反应至碘的颜色消失；然后将所得反应混合物在冰-水浴中冷却后至晶体析出，经过滤、甲醇和乙醇依次洗涤、真空干燥后得到晶体；将所得晶体溶解在水中，经活性碳脱色、填充有酸性离子交换树脂的色谱柱分离后，所得水溶液蒸去溶剂水后经冷冻干燥得到酮式麦芽七糖；(2)胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)的制备：将物质的量比为1∶x∶0.005的N-异丙基丙烯酰胺、二氨基乙硫醇盐酸盐、偶氮二异丁腈溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，所述x的值在0.01～0.025之间；通氮气30～35min后，升温到70～75℃并在氮气保护下搅拌反应7～8h；反应完毕冷却到室温后，先加入KOH除去二氨基乙硫醇盐酸盐上的HCl，然后倒入18～20倍于其体积的乙醚中形成沉淀；所得沉淀再用四氢呋喃/乙醚重新溶解/沉淀一次，沉淀干燥后即得产物胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)；(3)温敏含糖嵌段聚合物的制备：将步骤(2)得到的胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)和步骤(1)得到的酮式麦芽七糖溶解在N，N-二甲基甲酰胺中，然后在75～85℃下搅拌反应20～24h，所述每ml N，N-二甲基甲酰胺中溶有0.08～0.015g胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)，所述酮式麦芽七糖的物质的量是胺端基聚(N-异丙基丙烯酰胺)物质的量的4～6倍；反应完毕后，在搅拌下将乙醚加入到反应混合液中产生沉淀，过滤得到沉淀并干燥，所述乙醚体积是N，N-二甲基甲酰胺体积的8倍；将干燥后的沉淀用四氢呋喃溶解，所述四氢呋喃与N，N-二甲基甲酰胺的体积比为1.5～2∶1；过滤除去不溶物，得到四氢呋喃溶液；在搅拌下将乙醚滴加到上述四氢呋喃溶液中进行沉淀；过滤，沉淀减压干燥后即得温敏含糖嵌段聚合物；所述温敏含糖嵌段聚合物分子结构如下：其中，聚(N-异丙基丙烯酰胺)即PNIPAAm链段的数均分子量在10000～30000之间。