用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法

摘要

本发明涉及一种生物工程技术领域的用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，再借助苯环上的羧基分别与KLH和BSA的氨基形成肽键，形成CPZ偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA。抗原CPZ-KLH用于制备多克隆抗体，抗原CPZ-BSA用于间接酶联免疫吸附实验检测多克隆抗体效价，用胶体金标记多克隆抗体，将其作为示踪标记物，在膜上的检测线上固定抗原CPZ-BSA、质控线上固定抗兔的多克隆抗体，金标抗体与相应的抗原、抗体发生特异性结合被截留而显色，根据检测线、质控线显色与否来判定阴阳性结果。本发明可直接检测样品中的氯丙嗪小分子，检测速度快，所需时间短。

主权项

1、一种用胶体金免疫层析试验检测氯丙嗪的方法，其特征在于，包括如下步骤：①将CPZ半抗原通过重氮化反应与对氨苯甲酸连接，通过CPZ重氮化合物中苯环上的羧基与KLH和BSA的氨基形成肽键，将CPZ分别连接到KLH和BSA，从而合成CPZ的偶联物CPZ-KLH和CPZ-BSA；②用步骤①合成的CPZ-KLH完全抗原与等量的弗氏完全佐剂首次免疫新西兰大白兔，采用背部皮下多点免疫法，再用完全抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化加强免疫新西兰大白兔三次，每次免疫前耳静脉采血，以CPZ-BSA为包被抗原，用间接酶链免疫吸附试验测抗体效价，效价达到1∶10000以上时采血；先后采用硫酸铵沉淀法和亲和层析法纯化血清中的抗体IgG，获得抗CPZ的多克隆抗体；③用柠檬酸三钠还原法制备胶体金；④用制备好的胶体金来标记经过透析除盐处理的多克隆抗体蛋白；⑤将标记好的多克隆抗体蛋白喷涂到金标垫上，CPZ偶联物CPZ-BSA喷涂到T线，羊抗兔的多克隆抗体喷涂到C线，然后组装成试纸条；⑥把试纸条的测试端插入待检的液体样品中，不能超过Max线，由于毛细效应，液体的层析方向向前，与固定在T线、C线上的物质发生结合被截留而显色，根据T线、C线的显色情况判定阴阳性结果。