用环介导等温扩增方法检测创伤弧菌的试剂盒及方法

摘要

涉及一种用环介导等温扩增方法检测创伤弧菌的试剂盒及方法，试剂盒包括环介导等温扩增反应液A、Bst DNA聚合酶B、显色剂C；其中反应液A含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、上游内引物tgccactcggctacgataacgtttttgagctgtcac-ggcagttg、下游内引物acgcagacaaaacgctcacagtttttgagcttatcgccttcc-caat、上游外引物tggttcggttaacggctg、下游外引物gccatcaacatagcggctaa和1－1.5M甜菜碱；检测方法包括细菌DNA的提取、环介导等温扩增、显色检测等。其优点是快速、特异性强、灵敏度高且成本低。

主权项

1.一种用环介导等温扩增方法检测创伤弧菌的试剂盒，其试剂包括：(1)环介导等温扩增反应液A：含有10×Thermopol反应缓冲液、300-500uM dNTP、2-4mM硫酸镁、0.8-1.2uM上游内引物、0.8-1.2uM下游内引物、0.2-0.3uM上游外引物、0.2-0.3uM下游外引物和1-1.5M甜菜碱；其中10×Thermopol反应缓冲液含有200mM pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、100mM氯化钾、100mM硫酸铵、20mM硫酸镁和1％曲拉通X-100；上游内引物为：tgccactcggctacgataacgtttttgagctgtcacggcagttg；下游内引物为：acgcagacaaaacgctcacagtttttgagcttatcgccttcccaat；上游外引物为：tggttcggttaacggctg；下游外引物为：gccatcaacatagcggctaa；(2)Bst DNA聚合酶B：每微升含8个活性单位；(3)显色剂C：为10％的荧光染料SYBR GREEN I。