生殖间质细胞的培养方法

摘要

本发明涉及一种生殖间质细胞的培养方法，其技术要点是将取出的幼猪睾丸在冷却血2小时内剪成小块研磨，加入胶原消化酶进一步纯化过筛，随后，加入含有AB血清的1640培养液，放加CO₂培养箱中进行培养，待细胞生长良好收集备用。本发明有益效果是提供了一种生殖间质细胞的培养方法，生殖间质细胞是产生雄性激素的主要细胞，通过移植生殖间质细胞不但可以提高睾丸激素水平，促进生殖细胞生成，而且还增补了尚未发现的有效成份。生殖间质细胞成功的研制在临床应用上得了明显效果，初步解决了人们一直渴望解决的人类抗衰问题。

主权项

1、一种生殖间质细胞的培养方法，其特征在于：(1)生殖间质细胞培养：将取出的幼猪睾丸在冷缺血2小时内剪开并去掉鞘膜，然后将睾丸内组织剪成小块研磨，去掉结缔组织，加入胶原消化酶进一步纯化、过筛，随后，加入含有AB血清的1640培养液，每个培养瓶中加10ml的培养液，每毫升含细胞个数为103-105个，将培养瓶放入CO2培养箱中进行培养，温度为37℃恒温，并用Hank’s液定时冲洗，培养时间为6-7天，当细胞生长良好，无细菌生长，则收集备用；(2)生殖间质细胞保存：在具有生殖间质细胞的培养液中加入1.4mol/L的二甲亚砜及PH7.2的Hank’s液2ml后，装入试管中并密封，温度为0℃-4℃，4℃静置30-40分钟，以6-8分钟的速度降温至0℃，再按0.4-0.6℃/min速度降温至-80℃后，再放入-196℃氮液中；使用时，用40℃温水快速转动复温，然后放入CO2培养箱内37℃恒温培养48-72小时后，细胞复活良好，无细菌生长，才可使用。