低成本生产肽

摘要

本发明涉及一种使用微生物进行低成本生产包括抗微生物肽(AMP)在内的肽的方法。本方法与迄今已知现有技术相比能够大大提高肽/AMP的产量。同时本方法出人意料地使用荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)来生产AMP和其它的肽。本发明还提供了几种组分，可以单独或组合使用。本发明提供了肽/AMP与前体串联的产物。本发明也提供了新的把单体装配成多聚体，和切割多聚体以产生活性单体的方法。本发明也涉及应用这些融合到载体肽上的多聚体来生产融合蛋白。更合适地，多聚体和融合蛋白(多聚体和载体多肽)都缺少电荷平衡。令人惊奇地发现，在多聚体构建物中没必要给多个AMP拷贝补偿正电荷。因此，本发明可以使用更为广泛的多聚体和载体肽。

主权项

1.一种生物合成生产小肽的方法，所述方法包括：A)提供1)至少一个微生物细胞；和2)至少一种核酸，所述微生物细胞能够从该核酸表达出载体-肽融合多肽，所述融合多肽包含(a)至少一个高度表达的载体多肽，其通过可切割接头连接到(b)上，(b)至少一个肽多聚体，该肽多聚体包含至少两个串联排列的小肽单元，每一个小肽单元通过切割位点被连接到至少一个相邻的小肽单元上，所述切割位点包含至少一个Asp-Pro二肽，B)将所述核酸转染到所述微生物细胞内，获得转化的微生物细胞；C)将所述转化的微生物细胞置于细胞能够表达该核酸以生产出由此编码的载体-肽融合多肽的条件下；D)任选地，从转化的微生物细胞回收所述载体-肽融合多肽；E)任选地，进行切割反应，从所述肽多聚体上切割所述载体多肽；F)进行切割反应，以将多聚体的小肽单元从被此间切割下来，由此获得小肽；和G)任选地，进行末端切割反应，除去存在于小肽末端的切割位点氨基酸残基、或可切割接头氨基酸残基、或两者。