一种提取与纯化10－去乙酰基巴卡丁Ⅲ(10－DABⅢ)的方法

摘要

本发明公开了一种提取与纯化10-去乙酰基巴卡丁III(10-DABIII)的方法，该法主要包括二大部分，其一：先用醇类溶剂从红豆杉枝叶的超细粉(粒径≤10μm)中快速提取含10-DABIII及其衍生物类等有效成分，然后用萃取法获得含5～10％(wt)10-DABIII原料；其二：以5～10％(wt)10-DABIII原料，经硅胶柱层析，常压色谱柱层析以及水解等提纯、转化、精制步骤，工业化获得纯度大于99.5％(wt)以上的10-DABIII精品。

主权项

1、一种提取与纯化10-去乙酰基巴卡丁III(10-DABIII)的方法，其特征在于所说的提取方法主要包括如下两个步骤：(1)首先将红豆杉植物的茎叶和嫩枝进行超细粉碎得到超细粉，其粒径在10μm以下，小于植物细胞的平均直径15～25μm，从而使植物细胞中有效组分全部释放出来；(2)然后用醇类溶剂从上述超细粉中将包括10-DABIII及其衍生物在内的全部有效组分一次性地提取出来，过滤除去滤渣后，得到提取液，提取时的工艺条件为：料液比：超细粉(W)∶醇类溶剂(V)＝1∶1～2；提取温度：室温或加温40～60℃；提取时间：5～30分钟；搅拌转速：60～240转/分；其中所说的醇类溶剂是甲醇、95％工业酒精中的一种，料液比中的W以公斤计，V以升计；所说的纯化方法主要包括如下四个步骤：(1)首先将所得提取液置于旋转蒸发器中，蒸发浓缩除去醇类溶剂，得到浓缩提取液，用少量水稀释后，再用乙酸丁酯萃取剂进行萃取分离，萃取时的工艺条件为：相比：浓缩提取液(V)∶萃取剂(V)＝1∶1；温度：室温；萃取时间：在剧烈搅拌下3～8分钟；静止分层：0.5～1.5小时；分离得到乙酸丁酯萃取液，经蒸发除去萃取剂后得到含量为5～10％(wt)10-DABIII粗品原料，简称粗品A；(2)以粗品A为原料，用95％酒精加热溶解成均一溶液，然后加入粒径为10～50μm的工业硅胶，搅拌均匀，再蒸发除去95％酒精制成“硅胶混合物①”，然后将此“硅胶混合物①”置于填充硅胶的玻璃层析柱的上部，用体积比为1∶1的乙酸乙酯和环己烷组成的混合溶剂洗脱层析，分段收集馏分，取样分析，将合格的馏分蒸发除去混合溶剂后得到含量≥25％(wt)的10-DABIII“粗品B”；(3)以粗品B为原料，溶解于甲醇中，加入粒径为10～50μm的工业硅胶搅拌混匀后置于旋转蒸发器中蒸干，得到“硅胶混合物②”填充入大型制备色谱柱的上部，用体积比为1～4∶1的乙酸乙酯与环己烷组成的混合溶剂作洗脱剂，在常压或加压下进行洗脱，分段收集馏分，经高压液相色谱仪检测达标的馏分，进行蒸发除去混合溶剂，得到含量≥80％(wt)10-DABIII粗品C；(4)以粗品C为原料，溶解于甲醇中，构成均一的溶液，加入pH13-14的氢氧化钠水溶液，在10～80℃下，水解3～8小时，用氯化铵饱和溶液终止反应，使得以巴卡丁III为代表的10-DABIII类衍生物转化为10-DABIII，所得水溶液移入蒸发装置中，经减压蒸发器除去甲醇和水，获得浓缩物再按步骤(2)同样的方法制得“硅胶混合物③”，进一步进行玻璃柱层析，分段收集馏分，经检测合格的馏分进行蒸发除去溶剂后，得到纯度大于99.5％(wt)以上的10-DABIII精品，即本发明的目标产物。