发明名称 真菌抗原、其制造方法及含彼等之组合物
摘要 本案提供藉由实质上经除去细胞壁,或经除去至少一部分之细胞壁的真菌细胞所得之不溶性部分之真菌抗原,其之制造方法,编码该真菌抗原之核酸、含有该真菌抗原之生物学制剂,使用该生物学制剂之刺激免疫反应之方法,抑制脊椎动物对真菌之过敏反应之方法,及诊断脊椎动物之由来于真菌之疾病。
申请公布号 TWI232222 申请公布日期 2005.05.11
申请号 TW086112713 申请日期 1997.09.04
申请人 宝生物股份有限公司 发明人 竹迫 一任;水谷 滋利;远藤 政博;加藤 郁之进
分类号 C07K14/37;C12N15/31;A61K39/00 主分类号 C07K14/37
代理机构 代理人 陈长文 台北市松山区敦化北路201号7楼
主权项 1.一种真菌抗原,其系具有来自白假丝酵母之疫苗 活性或过敏原活性之抗原性蛋白质,其由具有序列 表之序列编号:1所示胺基酸序列,且分子量(SDS-PAGE, 还原条件下)约65,000之抗原性蛋白质所组成; 其中序列编号:1之序列如下: 2.一种真菌抗原,其系由具有疫苗活性或过敏原活 性之含有序列表之序列编号:5所示之胺基酸序列 之所组成; 其中序列编号:5之序列如下: 3.一种核酸,其系编码申请专利范围第1或2项之真 菌抗原者。 4.根据申请专利范围第3项之核酸,其系编码具有序 列表之序列编号:7所示之硷基序列且具有疫苗活 性或过敏原活性之; 其中序列编号:7之序列如下: 5.一种核酸,其系编码具疫苗活性或过敏原活性之 ,并可杂交于申请专利范围第3或4项之核酸。 6.一种真菌抗原,其系具来自白假丝酵母之疫苗活 性或过敏原活性之抗原性蛋白质,并由具有序列表 之序列编号:2所示胺基酸序列,且分子量(SDS-PAGE,还 原条件下)约25,000之抗原性蛋白质所组成; 其中序列编号:2之序列如下: 7.一种真菌抗原,其系由具有疫苗活性或过敏原活 性且含有序列表之序列编号:6所示之胺基酸序列 之所组成; 其中序列编号:6之序列如下: 。 8.一种核酸,其系编码申请专利范围第6或7项之真 菌抗原。 9.根据申请专利范围第8项之核酸,其系编码具有序 列表之序列编号:8所示之硷基序列且具有疫苗活 性或过敏原活性之; 其中序列编号:8之序列如下: 。 10.一种核酸,其系编码具疫苗活性或过敏原活性之 ,并可杂交于申请专利范围第8或9项之核酸。 11.一种真菌抗原,其系具有来自白假丝酵母之疫苗 活性或过敏原活性之抗原性蛋白质,并由具有序列 表之序列编号:3所示之胺基酸序列,且分子量(SDS- PAGE,还原条件下)约30,000之抗原性蛋白质所组成; 其中序列编号:3之序列如下: 。 12.一种真菌抗原,其系具有来自白假丝酵母之疫苗 活性或过敏原活性之抗原性蛋白质,并由具有序列 表之序列编号:4所示胺基酸序列,且分子量(SDS-PAGE, 还原条件下)约62,000之抗原性蛋白质所组成; 其中序列编号:4之序列如下: 。 13.一种真菌抗原组合物之制造方法,其中该真菌抗 原组合物系藉由以下步骤所得之不溶性部分: (1)取得真菌之活体细胞之步骤,该真菌系选自属于 下列真菌属所组成之群组者:假丝酵母属(Candida)、 霉属(Aspergillus)、隐球菌属(Cryptococcus)、毛霉属( Mucor)、根霉属(Rhizopus)、梨头霉属(Absidia)、诺卡氏 菌属(Nocardia)、组织孢浆絮属(Histoplasma)、芽酵母 属(Blastemyces)、珠霉菌属(Coccidioides)、发癣菌属( Trichophyton)、小孢霉属(Microsporum)、表皮癣菌属( Epidermophyton)、发螺菌属(Sporothrix)、黑色真菌( Dematiaceous fungi)、鳞斑霉属(Malassezia)、肺炎菌属( Preumocystis)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria )、枝孢属(Cladosporium)、葡萄孢属(Botrytis)、短梗霉 属(Aureobasidium)、镰孢属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma )、长蠕孢属(Helminthosporium)、脉孢菌属(Neurospora)、 缺胞壁属(Wallemia)、及红酵母属(Rhodotorula); (2)取得实质上去除细胞壁后之原生质体或类原生 质体之真菌细胞,或除去一部分细胞壁后之原生质 球状体或类原生质球状体之真菌细胞之步骤; (3)将实质上除去细胞壁,或除去一部分细胞壁之真 菌细胞予以破裂之步骤;及 (4)将步骤(3)所得之成分予以离心分离处理以取得 沉淀部分之步骤。 14.一种真菌抗原组合物之制造方法,其中该真菌抗 原组合物系藉由以下步骤所得之可溶化部分: (1)取得真菌之活体细胞之步骤,该真菌系选自属于 下列真菌属所组成之群组者:假丝酵母属(Candida)、 霉属(Aspergillus)、隐球菌属(Cryptococcus)、毛霉属( Mucor)、根霉属(Rhizopus)、梨头霉属(Absidia)、诺卡氏 菌属(Nocardia)、组织孢浆絮属(Histoplasma)、芽酵母 属(Blastemyces)、珠霉菌属(Coccidioides)、发癣菌属( Trichophyton)、小孢霉属(Microsporum)、表皮癣菌属( Epidermophyton)、发螺菌属(Sporothrix)、黑色真菌( Dematiaceous fungi)、鳞斑霉属(Malassezia)、肺炎菌属( Preumocystis)、青霉属(Penicillium)、链格孢属(Alternaria )、枝孢属(Cladosporium)、葡萄孢属(Botrytis)、短梗霉 属(Aureobasidium)、镰孢属(Fusarium)、木霉属(Trichoderma )、长蠕孢属(Helminthosporium)、脉孢菌属(Neurospora)、 缺胞壁属(Wallemia)、及红酵母属(Rhodotorula); (2)取得实质上去除细胞壁后之原生质体或类原生 质体之真菌细胞或去除一部分细胞壁后之原生质 球状体或类原生质球状体之真菌细胞之步骤; (3)将实质上除去细胞壁或除去一部分细胞壁之真 菌细胞予以破裂之步骤; (4)将步骤(3)所得之成分予以离心分离处理以取得 沉淀部分之步骤;及 (5)使用含有界面活性剂之缓冲液自不溶性部分分 别抽出可溶化部分之步骤。 15.根据申请专利范围第14项之制造方法,其中进一 步设置使用糖群特异性吸附体,将所得之可溶化部 分纯化之步骤。 16.根据申请专利范围第14或15项之制造方法,其中 可溶化部分含可溶性蛋白质。 17.根据申请专利范围第15项之制造方法,其中糖群 特异性吸附体为伴刀豆珠蛋白A固定化体。 18.根据申请专利范围第13~15、17项中任一项之制造 方法,其中藉由细胞壁溶解酵素处理及/或物理性 处理,取得实质上去除细胞壁或除去一部分细胞壁 之真菌细胞。 19.根据申请专利范围第13~15、17项中任一项之制造 方法,其中实质上除去细胞壁或除去一部分细胞壁 之真菌细胞为该真菌细胞之原生质体或原生质球 状体。 20.根据申请专利范围第13~15、17项中任一项之制造 方法,其中将实质上去除细胞壁或去除一部分细胞 壁之真菌细胞予以破裂所得之成分,于100000g以下 之条件下进行离心处理取得不溶性部分。 21.一种医药组合物,其系投予个体以诱发对真菌之 感染防御免疫或具疗效,其含有申请专利范围第1 、2、6、7、11、12项中任一项之真菌抗原。 22.一种疫苗组合物,其系投予个体以诱发对真菌之 感染防御免疫,或具疗效,其含有申请专利范围第1 、2、6、7、11、12项中任一项之真菌抗原。 23.一种抗真菌之刺激脊椎动物免疫反应之医药组 合物,其系包含申请专利范围第22项之疫苗组合物 。 24.根据申请专利范围第23项之医药组合物,其系于 作为疫苗组合物的投予对象之脊椎动物中,利用免 疫反应抑制疫苗组合物制造时所用之真菌及/或其 近缘菌之增殖,以预防或治疗起因于该真菌及/或 近缘菌之疾病。 25.一种过敏原组合物,其系投予个体具有预防或治 疗对真菌之过敏性疾病之效果;其含有申请专利范 围第1、2、6、7、11、12项中任一项之真菌抗原。 26.一种抑制脊椎动物对真菌之过敏反应之医药组 合物,其包含申请专利范围第25项之过敏原组合物 。 27.根据申请专利范围第26项之医药组合物,其系用 于在过敏原组合物的投予对象之脊椎动物中,藉由 该免疫反应预防或治疗起因于该真菌及/或近缘菌 之疾病。 28.一种由起因真菌之疾病诊断用组合物,其特征为 含有申请专利范围第1、2、6、7、11、12项中任一 项之真菌抗原。 图式简单说明: 第1图为表示白假丝酵母TIMM1768细胞(酵母型)之细 胞壁除去前后之形态之图。使用微分干涉显微镜( 尼控()公司制),倍率皆为1000倍。A为细胞壁 除去前之细胞B为细胞壁除去后之细胞。 第2图为表示烟霉细胞之细胞壁除去前后之形态 之图。使用微分干涉显微镜(尼控公司制),倍率皆 为400倍。A为细胞壁除去前之细胞,B为细胞壁除去 后之细胞。 第3图为表示含于小鼠之抗假丝酵母血清(第1道)、 兔之抗假丝酵母血清(第2道)、及健康人类血清(第 3道)之对来自白假丝酵母不溶性部分Ca-LSP之蛋白 质之抗体之存在。 第4图为表示含于小鼠之抗霉血清之对来自烟 霉不溶性部分Af-LSP之蛋白质(第1道)及来自微荚膜 新隐球酵母不溶性部分Grn-LSP之蛋白质(第2道)之抗 体之存在之图。 第5图为表示含于小鼠之抗假丝酵母血清之对来自 白假丝酵母不溶性部分Ca-LSP之蛋白质(第1道)、微 荚膜新隐球酵母不溶性部分Grn-LSP之蛋白质(第2道) 及烟霉不溶性部分Af-LSP之蛋白质(第3道)之抗体 之存在之图。 第6图为表示含于小鼠之抗假丝酵母血清之对来自 白假丝酵母不溶性部分Ca-LSP之蛋白质(第1道)及来 自菌丝型白假丝酵母不溶性部分Ca-LSP-M之蛋白质( 第2道)之抗体之存在之图。 第7图为表示菌丝型白假丝酵母细胞之细胞壁除去 前后之形态之图。使用微分干涉显微镜(尼控公司 制),倍率皆为400倍。A为细胞壁除去前之细胞,B为 细胞壁除去后之细胞。 第8图为表示于含人类末稍血淋巴球(PBMC)之RPMI-1640 培养基中添加Ca-LSP抗原液,开始培养后第7天之人 类IFN-产生量之图。
地址 日本