| 主权项 |
1.一种操作核酸俾使编码结合蛋白质至特定配体 之结合特 性达最佳化之方法,该结合蛋白质选自抗体及T细 胞受体 所组成之群,该方法包括下列步骤:(a)提供二或多 种编 码不同结合蛋白质(所有均对该特定配体具亲和性 )之核酸 ,该结合蛋白质选自抗体及T细胞受体所组成之群, 该核 酸具有至少一组剪接址,该组剪接址侧出于一或多 种编码 互补决定区(CDRs)之相反端;(b)混合该二或多种核酸 以 生成混合的编码该结合蛋白质之核酸亲代族群;以 及(c) 经由该组剪接址,随机地将该等一或多种经编码之 CDRs并 入该二或多种核酸之间以生成一不同于该亲代族 群之核酸 的不同族群,其中至少一个藉该不同族群编码之结 合蛋白 质之特征为:与亲代族群之成员比较其具最佳的结 合特性 ;及(d)自该不同族群筛选至少一种编码结合蛋白质 (特征 为与亲代族群成员比较具最佳结合特性)之核酸。 2.根据申请专利范围第1项之方法,其中步骤(a)进一 步包 括经由酵素性聚合反应来合成至少一种编码结合 蛋白质的 核酸。3.根据申请专利范围第2项之方法,其中该酵 素性聚合反 应为聚合链反应。4.根据申请专利范围第1项之 方法,其中步骤(a)进一步包 括化学合成至少一种编码结合蛋白质的核酸。5. 根据申请专利范围第1项之方法,其中步骤(c)进一 步包 括:(c1)于该等剪接址处将至少一组割裂址引进该 混合核 酸之亲代族群内;(c2)以一割裂剂割裂该等割裂址, 俾以 于各剪接址处生成其对接合系不相容的末端,并从 该等编 码结合蛋白质之核酸释出该一或多种编码CDRs之片 段;以 及(c3)将该等释出的经编码CDRs与该等编码结合蛋 白质之 核酸结合。6.根据申请专利范围第2项之方法,其中 步骤(c)进一步包 括于该二或多种核酸之间将该等剪接址之单股区 域锻化, 该等剪接址于互补股之间具有足够的核酸序列 相同性, 俾容许专一性的杂交作用。7.根据申请专利范围 第6项之方法,其中该二或多种核酸 系为单股者。8.根据申请专利范围第4项之方法,其 中步骤(c)进一步包 括于该二或二种以上的核酸之间将该等剪接址之 单股区域 化,该等剪接址于互补股之间具有足够的核酸 序列相 同性,俾容许专一性的杂交作用。9.根据申请专利 范围第8项之方法,其中该二或多种核酸 系为单股者。10.根据申请专利范围第1项之方法, 其中该结合蛋白质为 抗体。11.根据申请专利范围第1项之方法,其中该 结合蛋白质为 T细胞受体。12.根据申请专利范围第5项之方法,其 中该组割裂址为限 制辨识址。13.根据申请专利范围第12项之方法, 其中该等限制辨 识址系选自包括Bst XI,Fok I及Dra III所组成之群。14. 根据申请专利范围第5项之方法,其中该割裂剂系 为一 限制。图式简单说明:第一图为混合来自异元体 结合性 蛋白质的结合领域之示意图。顶图:异元体结合性 蛋白质 由二多(VH及VL)所编码。各多之结合袋包含三 分立结 合领域HCDR1至HCDR3,及L CDR1至LCDR3。(A)将不同的VH CDR与不同的VL CDR混合。(B)将CDR1与两种多之CDR2 及3混合。(C)将CDR3与两种多之CDR1及2混合。 |
