一种宏转录组文库的建库方法

摘要

本发明公开的一种宏转录文库的建库方法，其特征在于，在RNA提取完成后，先用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物的mRNA，mRNA产物在‑80℃保存以备后用，且将没有被Oligo(dT)的磁珠富集的其他RNA样品依次完成真核生物rRNA的去除和原核生物rRNA的去除，剩余产物‑80℃保存以备后用。将两次富集放入产物混合、纯化以及加入随机引物片段化，第一链的mix以及逆转录酶的共同作用下合成第一链(cDNA链)，然后加入第二链合成mix的完成第二链合成，再在3’加poly(A)，连接接头，进行PCR扩增，再进行凝胶片段选择，最后需要对文库进行检测。

主权项

一种宏转录文库的建库方法，其特征在于，在RNA提取完成后，先用带有Oligo(dT)的磁珠富集真核生物的mRNA，mRNA产物在‑80℃保存以备后用，且将没有被Oligo(dT)的磁珠富集的其他RNA样品依次完成真核生物rRNA的去除和原核生物rRNA的去除，剩余产物‑80℃保存以备后用。将两次富集放入产物混合、纯化以及加入随机引物片段化，第一链的mix以及逆转录酶的共同作用下合成第一链(cDNA链)，然后加入第二链合成mix的完成第二链合成，再在3’加poly(A)，连接接头，进行PCR扩增，再进行凝胶片段选择，最后需要对文库进行检测，具体包括如下步骤：(1)真核mRNA纯化步骤；(2)真核生物rRNA去除步骤；(3)原核生物rRNA去除步骤；(4)所用RNA富集以及RNA的片段化步骤；(5)第一链合成步骤；(6)第二链合成步骤；(7)加A、加接头步骤；(8)磁珠片段选择步骤；(9)PCR扩增以及片段选择步骤；(10)文库质检步骤。