单个B细胞培养方法

摘要

本文报导了得到B细胞的方法，其包括以下步骤：a)标记B细胞，b)将标记的B细胞沉积为单细胞，c)和饲养细胞共培养单细胞沉积的B细胞，d)选择步骤c)中增殖和分泌IgG的B细胞并从而得到B细胞。标记可以是IgG⁺CD19⁺-B细胞、IgG⁺CD38⁺-B细胞、IgG⁺CD268⁺-B细胞、IgG^-CD138⁺-B细胞、CD27⁺CD138⁺-B细胞或CD3^-CD27⁺-B细胞。所述方法可包括在沉积步骤以前，在EL-4B5培养基中在37℃孵育1小时所述B细胞的步骤。所述方法还可包括在共培养以前离心所述单细胞沉积的B细胞的步骤。在共培养中，可使用包含白介素-1β和肿瘤坏死因子α和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)Cowans菌株细胞或BAFF或白介素-2和/或白介素-10和/或白介素-6和/或白介素-4的饲养混合物。

主权项

选择B细胞的方法，所述方法包括以下步骤：a)与作为饲养细胞的鼠EL‑4B5细胞共培养B细胞群的每个B细胞,所述每个B细胞已沉积为单细胞，b)选择步骤a)中增殖和分泌抗体的B细胞克隆，其中在合成的饲养混合物的存在下进行共培养，所述合成的饲养混合物包含IL‑1β、TNFα、IL‑10和选自IL‑21、SAC、BAFF、IL‑2、IL‑4和IL‑6的一种或多种。