一种生产芍药双苷的方法

摘要

本发明公开了一种生产芍药双苷的方法，包括：将外植体消毒后接入诱导培养基中诱导产生愈伤组织；将所述愈伤组织接入增殖培养基，光照条件下进行继代培养后，继代培养完成后从愈伤组织中提取芍药双苷。与栽培芍药的芍药双苷含量相比，本发明培养的愈伤组织中芍药双苷的含量与其相当甚至更高，但芍药双苷的积累时间却从2～4年缩短到30～60天，而且整个过程中可以避免土壤、水等环境中农药残留、重金属等有害物质的污染。因此，利用本方法生产芍药双苷，不仅可以显著生产时间、降低生产成本，而且生产的芍药双苷具有更高的安全性。

主权项

一种生产芍药双苷的方法，其特征在于，包括：(1)外植体的消毒剪取实验室培养的芍药的根，先用流水冲洗20min，把外部泥土冲洗干净，再用刀片将外皮刮除干净，再用洗洁精稀释液浸泡漂洗20～30min，在自来水下冲洗干净；用吸水纸吸干，在超净工作台上用75％酒精消毒30s，再用10％NaClO浸泡20min，无菌水冲洗3‑5次，再用已灭菌的滤纸吸干其上水分；(2)愈伤组织的诱导培养将消毒洗净后的根切成厚度1mm的圆片，再切成对半，接入诱导培养基中进行诱导培养，培养温度为24℃，每天的光照时间为14h，光照强度为1500lx，培养周期25天；(3)愈伤组织的增殖培养选取上述步骤中不褐化、生长状态稳定的愈伤组织，将其在超净台中切割成小块后转接入增殖培养基中进行培养，培养温度为24℃，每天的光照时间为14h，光照强度为1500lx；以32d为一次继代培养周期；诱导培养基：WPM培养基+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+6‑苄氨基嘌呤2mg/L+萘乙酸0.2mg/L+2，4‑二氯苯氧基乙酸0.2mg/L，培养基的pH值为5.2；增殖培养基：WPM培养基+蔗糖30g/L+琼脂8g/L+6‑苄氨基嘌呤0.5mg/L+萘乙酸1mg/L+脱叶灵0.1mg/L，培养基的pH值为5.2；(4)芍药双苷的提取取出继代培养的芍药根愈伤组织，置于60℃烘箱内烘干，取干品0.3g；置于研钵中研成粉末后，用80％甲醇‑水溶液浸渍，60℃下超声处理30min获得芍药双苷粗提物；将芍药双苷粗提物定容至10mL，10000r/min离心10min，取上清，经0.22μm的微孔滤膜滤过；所述芍药的品种为“蒲棒”或“线条”。