可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒

摘要

本发明公开了可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备ELISA试剂中的应用及其ELISA试剂盒，ELISA试剂盒含有可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白包被的反应板、酶标抗体、显色液和终止液，将该试剂盒用于检测I型鸭病毒性肝炎抗体具有特异性强、重现性好、敏感度高，与用全病毒作包被抗原的ELISA试剂盒检测的符合率高，可用于临床样品的检测。

主权项

可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白在制备检测I型鸭病毒性肝炎抗体的ELISA试剂中的应用，其特征在于，所述可溶性蛋白的制备步骤如下：将SEQ ID NO.3所示序列的第9～1376位核苷酸连接于pET‑32(a)+载体的多克隆酶切位点处，然后以大肠杆菌Rosetta、BL21或BL21(DE3)PLYS为宿主菌，在Amp抗性的LB培养基中活化后，在IPTG终浓度为0.2～1.0mmol/L、温度为20～39℃条件下诱导表达4～12小时，收集菌液，离心后收集菌体，将收集的菌体用20mmol/L、pH为8.0的Tris‑HCl悬浮，然后在冰浴下超声，破碎后进行离心，上清用Ni²⁺‑NTA琼脂糖凝胶柱纯化，透析，超滤得可溶性I型鸭肝炎病毒3D蛋白。