发明名称 |
一种慈姑原生质体的制备方法 |
摘要 |
本发明涉及一种慈姑原生质体的制备方法。本发明将慈姑经过慈姑茎尖培养、试管苗水培预处理、原生质体的酶解、原生质体的纯化、原生质体的悬浮得到慈姑原生质体。本发明克服了现有慈姑的常规育种非常困难,易造成栽培品种遗传基础单一,阻碍慈姑品种改良等缺陷。本发明利用了茎尖组织培养技术获得了无菌的慈姑壮苗,为原生质体的分离提供了最佳的外植体,其次采用酶解法分离出高质量的慈姑原生质体,且其产量在2×10<sup>6</sup>个/克以上,活力超过80%,绝大多数为球形的,其细胞膜完整且富含叶绿体,具有较高活力,能满足后续各种研究需要。 |
申请公布号 |
CN104278007A |
申请公布日期 |
2015.01.14 |
申请号 |
CN201410591784.X |
申请日期 |
2014.10.27 |
申请人 |
扬州大学 |
发明人 |
徐小勇;钱荣;陈学好;李良俊;程立宝;徐强;高红胜;齐晓花 |
分类号 |
C12N5/04(2006.01)I |
主分类号 |
C12N5/04(2006.01)I |
代理机构 |
南京中新达专利代理有限公司 32226 |
代理人 |
孙鸥;朱杰 |
主权项 |
一种慈姑原生质体的制备方法,其特征在于步骤:(1)慈姑茎尖培养:将慈姑茎尖接种在茎尖培养基上培养;(2)试管苗水培预处理:将步骤(1)的试管苗移入装有无菌水的广口瓶中培养;(3)原生质体的酶解:剪取步骤(2)的试管苗新长出的叶片,切成条状,加入酶液进行酶解;(4)原生质体的纯化:用筛网过滤步骤(3)的酶液,并用洗液冲洗,离心去上清液,再加入洗液,然后用吸管轻轻注入到蔗糖溶液界面上,离心吸取中间部分的原生质体。(5)原生质体的悬浮:将步骤(4)纯化的原生质体悬浮于原生质体液体培养基中。 |
地址 |
225009 江苏省扬州市大学南路88号 |