一种检测ATP适配子和ATP的方法

摘要

一种检测ATP适配子和ATP的方法，属于生物技术领域。解决现有检测ATP的方法操作繁杂，样品消耗量大，难于微型化及灵敏度仅为毫摩尔级的缺点。该方法采用DNA微阵列技术，固定ATP适配子，以带有荧光染料CY5的DNA互补链为标记物，通过杂交反应标记生物芯片，再利用ATP与ATP适配子的特异性识别作用，结合微阵列荧光扫描仪，获得生物芯片上荧光染料的荧光信号，可实现ATP适配子和ATP的同时检测。本方法简便，灵敏度可达到1nM，可同时检测ATP适配子和ATP，ATP检测限为：1nM，线性范围为：3个数量级。

主权项

一种检测ATP适配子和ATP的方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤一：将ATP适配子与多T链按摩尔浓度比1:3和点样液混合得到ATP适配子溶液，在基片上进行点样，得到ATP适配子生物芯片，所述的ATP适配子的浓度为0.1μM～20μM；步骤二：将步骤一得到的ATP适配子生物芯片上的ATP适配子与CY5标记的DNA互补链在温度为25℃～30℃，相对湿度为80%～90%的恒温恒湿箱中进行杂交反应1h，得到荧光标记的ATP适配子生物芯片，所述的CY5标记的DNA互补链的浓度为0.08μM～0.1μM；步骤三：将步骤二得到的荧光标记的ATP适配子生物芯片与ATP样品溶液在25℃～30℃反应1h，得到ATP与ATP适配子相互作用后的生物芯片，所述的ATP样品溶液是由ATP反应溶液和ATP混合得到的，所述的ATP样品溶液的pH值为7.6，ATP反应溶液的组成为：含有21mmol/L氯化钾的15mmol/L～25mmol/L氨基丁三醇缓冲溶液；步骤四：将步骤三得到的ATP与ATP适配子相互作用后的生物芯片放入微阵列扫描仪中进行检测，得到ATP适配子生物芯片的荧光检测信号。