转人溶菌酶基因的动物细胞的生产方法

摘要

本发明涉及一种转人溶菌酶基因的转基因克隆大型家畜的生产方法，其操作步骤如下：(1)构建含有人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体，(2)构建人溶菌酶乳腺特异表达载体与双标记选择载体和单标记选择载体的串联结构，将串联结构DNA导入家畜体细胞核内，获得转基因细胞，(3)转基因细胞作为核供体进行体细胞克隆，获得转有人溶菌酶基因的转基因克隆动物。本发明所研究的重组人溶菌酶，具有与天然人溶菌酶相同的生物活性；含有重组人溶菌酶的牛奶可以开发成保健牛奶及奶制品；纯化的重组人溶菌酶可以开发成防腐剂、食品添加剂、保健品和药品。

主权项

一种转人溶菌酶基因的转基因克隆大型家畜的动物细胞的生产方法，其操作步骤如下：(1)构建含有人溶菌酶基因的乳腺特异表达载体，(2)构建人溶菌酶乳腺特异表达载体与双标记选择载体或单标记选择载体的串联结构，将串联结构DNA导入大型家畜的体细胞核内，获得转基因细胞，所述乳腺特异表达载体为pBC2-sigHLY，所述的pBC2为在pBC1的6407-6438bp处缺失31bp所构建的骨架载体；所述的sigHLY由牛beta-casein信号肽序列，人溶菌酶的1-4外显子和1-3内含子组成，所述乳腺特异表达载体与双标记选择载体串联结构DNA为pBC2-sigHLY-EGFP-NEO，所述乳腺特异表达载体与单标记选择载体串联结构DNA为pBC2-sigHLY-NEO，所述大型家畜为牛、山羊、绵羊、猪或兔。