| 主权项 |
1.一种筛选用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含 测定该化合物之环加氧(COX)抑制活性; 测定该化合物之PDE2抑制活性;及 选出具有COX抑制活性低于该PDE活性以供治疗赘疣 新生之化合物。 2.根据申请专利范围第1项之方法,其中该化合物系 藉由测定该化合物是否于赘疣细胞培养物中减低 肿瘤细胞生长而进一步进行筛检;并筛检出抑制赘 疣细胞以治疗赘疣新生之化合物。 3.根据申请专利范围第2项之方法,其中生长抑制作 用系藉由评估该化合物是否诱导细胞凋亡而确定 。 4.一种筛选用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含: 测定该化合物之赘疣细胞生长抑制活性; 测定该化合物之PDE2抑制活性;及 筛选出呈现赘疣细胞生长及该PDE抑制活性之化合 物。 5.根据申请专利范围第4项之方法,其进一步包含测 定该化合物是否会于赘疣细胞中诱导细胞凋亡;并 筛检出诱导细胞凋亡之化合物。 6.根据申请专利范围第5项之方法,其进一步包含: 测定该化合物是否具有COX抑制活性;并筛检出该化 合物相对于对抗该PDE之抑制活性,具有较低COX抑制 活性之化合物。 7.一种筛选用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含测定该化合物之PDE2抑制活性,及筛选出具有 此类抑制活性之化合物。 8.根据申请专利范围第7项之方法,其中该化合物系 藉由测定该化合物是否于赘疣细胞中诱导细胞凋 亡而进一步进行筛检,并筛检出具有凋亡-诱导活 性之化合物。 9.一种监定用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含测定该化合物之环加氧(COX)抑制活性;及测 定该化合物之PDE抑制活性,其中该PDE之特征为: (a)cGMP特异性超越cAMP; (b)于cGMP受质存在下具有正协同动力学特性; (c)针对cGMP具有次微莫耳之亲和性;及 (d)对与经纯化cGMP-依赖性蛋白质激进行之培育 不敏感;且 筛选出具有COX抑制活性低于该PDE活性之化合物。 10.根据申请专利范围第9项之方法,其进一步包含 测定该化合物是否于赘疣细胞培养物中抑制肿瘤 细胞生长;并筛检出抑制肿瘤细胞生长之化合物。 11.根据申请专利范围第9项之方法,其进一步包含: (a)测定该化合物是否会诱导肿瘤细胞之细胞凋亡; 及 (b)筛检出诱导细胞凋亡以供治疗赘疣新生之化合 物。 12.一种筛选用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含测定该化合物之生长抑制活性;测定该化合物 之PDE抑制活性,其中该PDE之特征为; (a)cGMP特异性超越cAMP: (b)于cGMP受质存在下具有正协同动力学特性; (c)针对cGMP具有次微莫耳之亲和性;及 (d)对与经纯化Cgmp-依赖性蛋白质激进行之培育 不敏感;且 筛选出呈现生长抑制活性及该PDE抑制活性之化合 物。 13.一种筛检具有供治疗赘疣新生潜力之化合物的 方法,其包含测定该化合物之PDE抑制活性,其中该 PDE之特征为: (a)cGMP特异性超越cAMP; (b)于cGMP受质存在下具有正协同动力学特性; (c)针对cGMP具有次微莫耳之亲和性;及 (d)对与经纯化cGMP-依赖性蛋白质激进行之培育 不敏感;且 筛选出具有此类抑制活性之化合物。 14.根据申请专利范围第13项之方法,其进一步包含 测定该化合物是否于细胞中诱导细胞凋亡,并进一 步筛选出具有凋亡诱导活性之化合物。 15.根据申请专利范围第13项之方法,其进一步包含 测定该所选之化合物是否抑制前列腺素合成,并进 一步筛选出具有实质上前列腺素抑制活性之化合 物。 16.根据申请专利范围第13项之方法,其中该PDE活性 系藉由自含有PDE5与该新颖PDE之赘疣细胞系分离得 cGMP-特异性PDE活性,藉由将该组合得之PDE分离物暴 露至其浓度不抑制该新颖PDE之PDE5抑制剂而抑制PDE 5活性,及确定该测试化合物对剩余cGMP之抑制活性 而确定,藉此可测定得该测试化合物对该新颖PDE之 抑制活性。 17.一种筛选用于处理欲受治疗之赘疣之化合物的 方法,其包含: (a)评估该化合物是否于欲受治疗赘疣之完整赘疣 细胞中增加PKG活性; (b)评估该化合物是否于赘疣细胞中减少-连环蛋 白;及 (c)筛选出于完整赘疣细胞造成PKG活性增加且于欲 受治疗赘疣中减少-连环蛋白之化合物。 18.一种供监定具有供治疗赘疣新生潜力之化合物 的方法,其包含: 筛选出于赘疣中增加PKG活性;及 评估该化合物之赘疣生长抑制活性,其中增加PKG活 性且具有赘疣生长抑制活性之化合物具有用以抑 制赘疣而实质上不抑制正常细胞生长之潜力。 19.一种监定具有供治疗赘疣新生潜力之化合物的 方法,其包含: 测定该化合物之环加氧(COX)抑制活性;与 测定该化合物是否于赘疣细胞中增加PKG活性; 其中低COX抑制活性及PKG活性增加为该化合物具有 治疗赘疣新生潜力之指标。 20.一种筛选用于治疗赘疣新生之化合物的方法,其 包含: 测定该化合物之赘疣生长抑制活性; 测定该化合物是否于赘疣细胞中增加PKG活性;及 选出呈现赘疣生长抑制活性且于赘疣细胞中增加 PKG活性之化合物。 21.一种筛选用于处理欲受治疗之赘疣之化合物的 方法,其包含评估于经该化合物处理之赘疣中PKG是 否促使-连环蛋白被磷酸化,及筛选出当以该化 合物处理欲受治疗之赘疣时会促使PKG磷酸化-连 环蛋白之化合物。 图式简单说明: 图1为得自SW480赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,以自DEAE- Trisacryl M管柱溶析液进行分析时所呈现之cGMP活性 图。 图2为得自SW480赘疣细胞之重新加样cGMP磷酸二酯 ,以自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液进行分析时所呈现 之cGMP活性图。 图3为本发明新颖PDE之动力学特性图。 图4说明舒林酸硫化物衍生物或舒林酸衍生物( 例如依席舒林)对经纯化环加氧活性之影响。 图5说明化合物B及E对COX抑制作用之影响。 图6说明舒林酸硫化物及依席舒林对自经培养肿瘤 细胞所纯化得PDE4及PDE5之影响。 图7说明舒林酸硫化物对HT-29细胞中环状核酸浓 度之影响。 图8说明化合物B之磷酸二酯抑制活性。 图9说明化合物E之磷酸二酯抑制活性。 图10说明舒林酸硫化物及依席舒林对HT-29细胞之细 胞凋亡及细胞坏死的影响。 图11说明当藉由DNA断裂进行测定时,舒林酸硫化物 及依席舒林对HT-29细胞生长抑制及细胞凋亡诱导 之影响。 图12说明化合物E之细胞凋亡-诱导特性。 图13说明化合物B之细胞凋亡-诱导特性。 图14说明舒林酸硫化物及依席舒林对肿瘤细胞生 长之影响。 图15说明舒林酸硫化物及对照组(DMSO)之生长拆制 及细胞凋亡-诱导活性。 图16说明化合物E之生长抑制活性。 图17说明小鼠乳腺器官培养物中前-恶性、赘疣新 生性病害由舒林酸代谢物所产生之抑制作用。 图18A为得自无添加cGMP下之经药剂处理细胞胞溶产 物之SW480细胞胞溶产物的SDS蛋白质凝胶,其中系将 细胞与DMSO(0.03%,第1与2行)、依席舒林(200、400与600 M,第3、4、5行)及E4021(0.1、1与10M,第6、7、8行) 培养而加以处理。 图18B为得自于添加cGMP下之经药剂处理细胞胞溶产 物之SW480细胞胞溶产物的SDS(X一射线底片曝光)凝 胶PKG分析,其中系将细胞与DMSO(0.03%第1与2行)依席 舒林(200、400与600M,第3、4、5行)及E4021(0.1、1与10 M,第6、7、8行)培养而加以处理。 图19为依席舒林相较于对照组,对赘疣细胞中-连 环蛋白及PKG浓度之影响的西方转渍实验结果之柱 状图。 图20为得自HTB-26赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,当以得 自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液进行分析时所呈现之 cGMP活性图。 图21为得自HTB-26赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,当以得 自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液,与低及高受质浓度进 行分析时所呈现之cGMP活性图。 图22为得自LnCAP赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,当以得 自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液进行分析时所呈现之 cGMP活性图。 图23为得自LnCAP赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,当以得 自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液,与低及高受质浓度进 行分析时所呈现之cGMP活性图。 图24为说明PDE5之非-催化性cGMP结合位点对于环状 核酸类似物及所选PDE5抑制剂之特异性结合的柱 状图。 图25为得自SW480赘疣细胞之cGMP磷酸二酯,当以得 自使用存于缓冲液之乙二醇的DEAF-Trisacryl M管柱溶 析液进行分析时所呈现之cGMP活性图。 图26为得自生长于滚瓶之SW480赘疣细胞的cGMP磷酸 二酯,当以得自DEAE-Trisacryl M管柱溶析液进行分 析时所呈现之cGMP活性图。 图27A显示LNCaP细胞中之组蛋白-相关连断裂DNA于以 50M化合物I处理后所呈现之时间一依赖型增加。 图27B显示PrEC细胞以化合物I(50M)处理期间,于多 达4天之处理并未影响DNA断裂。 |
