基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺

摘要

本发明涉及一种生物工程，基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是首先进行工程菌发酵扩增，热激诱导，收集菌体。经缓冲液抽提、再经离子交换、分子筛柱层析分离纯化。本发明具有工艺流程简单、SOD半衰期长、产量高、单位成本低等优点，本产品可广泛应用在化妆品、保健食品、医疗等领域。

主权项

1、一种生物工程基因重组人源铜锌超氧化物歧化酶的制备工艺，其特征是：(1)、挑取工程菌单菌落接种在含氨苄的LB培养基斜面培养，然后接种到含AMP100μg/ml的LB培养基的三角瓶中，30℃、180转/分，振荡培养10小时，OD值达到1.0时，收集菌液；(2)、取上述菌液，以1∶10的比例，接种到含有AMP100μg/ml的改良M9培养基的发酵罐中，30℃培养6小时，OD值达2.5-3.0时，迅速升温至42℃，热激诱导表达，然后再培养3-4小时，离心收集菌体；(3)、取菌体，用0.9％的NaCl洗两次，然后用PH7.8TES缓冲液悬浮菌体，冰浴条件下搅拌30分钟，加入稀释6倍的TES溶液，冰浴条件下搅拌40分钟，离心取上清液，离心的菌体加TES溶液冷冻，取出速暖至冰水混合物状，加入稀释6倍的TES溶液，搅拌40分钟，离心取上清液，将上述，上清液经超滤浓缩，得粗酶液；(4)、粗酶液经透析：DEAE-Sephadex-A50离子交换柱层析，其全部进入胶面后，再用PBS缓冲液进行梯度洗脱，收集目的蛋白峰溶液，再用Sephadex-200分子筛柱层析，收集含Cu·Zn-SOD酶的活力部分，用PH7.8PBS溶液洗脱，自动馏分收集器收集，冷冻、干燥。