一种用于检测B-raf基因突变的试剂盒

摘要

本发明涉及一种用于检测B-raf基因突变的试剂盒，包括质控引物探针内标混合液和检测引物探针内标混合液，质控引物探针内标混合液包括质控引物对、B-raf基因特异性探针、内标引物对、内标特异性探针和内标模板；检测引物探针内标混合液包括Braf基因V600E突变检测特异性引物对、B-raf基因特异性探针、扩增阻断核酸序列、内标引物对、内标特异性探针和内标模板。该试剂盒将扩增阻碍突变系统和末端磷酸化的野生型扩增阻断核酸序列相结合，将脱氧次黄嘌呤引入到检测B-raf基因V600E突变检测特异性正向ARMS引物中，使每个样本的检测平行进行质控PCR反应和检测PCR反应，每个反应体系均带有能有效避免假阴性及孔间差的内标系统，且成本低，灵敏度高，更能控制批内及批间差。

主权项

一种用于检测B‑raf基因突变的试剂盒，包括质控引物探针内标混合液和检测引物探针内标混合液，其特征在于：所述质控引物探针内标混合液包括质控引物对、B‑raf基因特异性探针、内标引物对、内标特异性探针和内标模板；所述检测引物探针内标混合液包括Braf基因V600E突变检测特异性引物对、B‑raf基因特异性探针、扩增阻断核酸序列、内标引物对、内标特异性探针和内标模板；所述Braf基因V600E突变检测特异性引物对的上游引物3’端第三位核苷酸为脱氧次黄嘌呤；所述质控引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1所示，所述质控引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述B‑raf基因特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID No.3所示；所述Braf基因V600E突变检测特异性引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.4所示；所述Braf基因V600E突变检测特异性引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.2所示；所述扩增阻断核酸序列的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示，且其3’端磷酸化；所述B‑raf基因特异性探针和所述内标特异性探针带有不同的荧光基团；所述内标引物对的上游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，所述内标引物对的下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.7所示；所述内标特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID No.8所示；所述内标模板的核苷酸序列如SEQ ID No.9所示。