双层细胞球的制作方法

摘要

本发明涉及一种双层细胞球的制作方法。本发明所要解决的技术问题是提供一种双层细胞球的制作方法，全面真实地反映体内细胞的生存环境，直观再现特定条件下两种细胞间的相互作用。解决该问题的技术方案是：双层细胞球的制作方法：a、分别培养两种不同的细胞；b、选其中一种细胞制作单个细胞悬液；c、控制瓶内单个细胞浓度为1×105-1×106个/毫升；d、置于37度含5％的CO2培养箱内静置1-4h；e、旋转培养使其滚成球状，每隔10-14h换液一次；f、制作另一种细胞的单个细胞悬液，并将其加入步骤e得到的含细胞球的培养液中，继续旋转培养使管内两种细胞形成边界清楚的、双层结构的球形细胞团，每隔10-14h换液一次。本发明主要用于细胞的三维培养。

主权项

一种双层细胞球的制作方法，其特征在于步骤如下：a、按照常规培养方法在培养液内分别培养两种不同的细胞；b、选取其中一种细胞制作单个细胞悬液，即倒掉培养瓶中的培养液，加入1 2ml PBS洗涤液柔和洗1 2遍后倒掉该洗涤液，再加1 2ml消化液静置15s 5min，在显微镜下动态监测，当出现细胞间隙增大，胞质回缩，细胞变圆时便停止消化，倒掉消化液加入培养液，并用吸管吸取瓶内培养液，反复吹打瓶壁细胞形成单个细胞悬液；c、调整培养瓶内单个细胞的浓度，使瓶内所含单个细胞浓度为1×105 1×106个/毫升；d、将上述细胞悬液加入EP管中，并置于37摄氏度含5％的CO2培养箱内静置1 4h；e、将静置后的EP管以1 7转/分钟的转速旋转培养，并每隔10 14h更换一次培养液，第一次更换培养液时需保证管内细胞已滚成球状，培养时间视实验要求而定；f、依次重复步骤b、c、d，制作另一种细胞的单个细胞悬液，并将其加入步骤e得到的含细胞球的培养液中，继续以1 7转/分钟的转速旋转培养，并每隔10 14h更换一次培养液，第一次更换培养液时需保证管内两种细胞已形成边界清楚的、双层结构的球形细胞团，培养时间视实验要求而定。